番茄LeACBF基因的克隆及表達(dá)研究.pdf

1、苯丙氨酸解氨酶(PAL)是一種誘導(dǎo)酶,許多環(huán)境條件以及植物激素對(duì)其活性都有不同程度的影響,它與植物抗逆有著極其密切的關(guān)系,對(duì)植物的生理意義非常重大.ACBF編碼了結(jié)合在苯丙氨酸解氨酶啟動(dòng)子AC富集區(qū)上的一個(gè)轉(zhuǎn)錄因子,ACBF基因已經(jīng)在擬南芥、煙草等植物中得到了克隆.根據(jù)GenBank中的擬南芥、煙草ACBF家族成員序列比較的結(jié)果,在該基因的保守區(qū)設(shè)計(jì)簡(jiǎn)并引物(degenerate primer),以轉(zhuǎn)色期普通番茄果實(shí)的RNA為模板,進(jìn)行

2、RT-PCR擴(kuò)增,獲得239 bp的擴(kuò)增片段,以此片段作為探針篩選轉(zhuǎn)色期普通番茄果實(shí)cDNA噬菌體文庫(kù),獲得了包含全長(zhǎng)編碼區(qū)的陽(yáng)性克隆.序列分析表明這個(gè)基因?qū)儆贏CBF家族,命名為L(zhǎng)eACBF.LeACBF的cDNA長(zhǎng)1503bp,編碼區(qū)含有428個(gè)氨基酸.LeACBF與煙草中的ACBF基因在DNA水平上的序列相似性為83﹪,在氨基酸水平上的序列相似性為79﹪,是一個(gè)新基因.LeACBF的DNA序列已在GenBank登錄,登錄號(hào)為AY5

3、06544.Northern雜交的結(jié)果分析表明:LeACBF基因在轉(zhuǎn)色期番茄的根、莖、葉、果實(shí)等組織中均有表達(dá),并且表達(dá)量無(wú)明顯差異.用不同的紫外線照射時(shí)間處理番茄幼芽,苯丙氨酸解氨酶(PAL)的活性呈先是增加,達(dá)到最大值后再減小的趨勢(shì).通過(guò)Northern雜交結(jié)果的分析,LeACBF基因的表達(dá)量與苯丙氨酸解氨酶(PAL)的活性變化具有相同的趨勢(shì).表明在紫外光照射條件下,LeACBF編碼的轉(zhuǎn)錄因子的變化趨勢(shì)與苯丙氨酸解氨酶(PAL)活性