PANKL-RANK-OPG系統(tǒng)在感染松動假體周圍骨溶解中的作用.pdf

1、RANKL/RANK/OPG系統(tǒng)的失衡已被大量文獻證實與THA術后無菌性松動引起的假體周圍骨溶解密切相關，但感染松動引起的假體周圍骨溶解其發(fā)病機制則鮮見報道。本研究擬通過檢測RANKL/RANK/OPG信號通路在體外細胞和界膜組織中的表達情況，探討RANKL/RANK/OPG系統(tǒng)是否與感染松動引起假體周圍骨溶解的發(fā)病相關。
　　第一章 RANK在巨噬細胞中的表達
　　目的:探討凝血酶和UHMWPE顆粒處理后巨噬細胞中RANK

2、mRNA的表達差異。
　　方法:用佛波酯將U937單核細胞誘導為巨噬細胞，通過細胞形態(tài)學觀察、免疫學標志檢查及體外吞噬功能檢測等方法鑒定是否成功。將UHMWPE顆粒用球磨機研磨后進行其直徑、性質(zhì)和內(nèi)毒素含量檢測。將誘導成功的巨噬細胞分別與凝血酶和制備好的UHMWPE顆粒共同培養(yǎng)，MTT法檢測凝血酶和UHMWPE顆粒對巨噬細胞的最佳濃度。將巨噬細胞分為細胞+凝血酶組、細胞+UHMWPE顆粒組和單純細胞組（對照組），實時熒光定量PCR

3、技術檢測RANK mRNA在三種巨噬細胞中的表達差異。
　　結果:U937單核細胞經(jīng)佛波酯處理后能成功被誘導為巨噬細胞，具備巨噬細胞的形態(tài)特征、表達特異的分化抗原CD14和較好吞噬能力。研磨后UHMWPE顆粒平均直徑約為8.46μm±6.30μm，內(nèi)毒素含量為0.053 EU/ml，符合實驗要求。MTT法檢測凝血酶和UHMWPE顆粒對巨噬細胞的最佳濃度分別為50 U/ml和0.1 mg/ml。經(jīng)顆粒處理后的巨噬細胞，其RANK m

4、RNA的表達水平明顯高于其他兩組，P＜0.01，而凝血酶處理組RANK mRNA的表達水平也明顯高于對照組，P＜0.01。
　　結論:U937單核細胞能被佛波酯成功誘導為成熟的巨噬細胞。凝血酶處理后巨噬細胞中RANK mRNA的表達水平明顯升高，但RANK mRNA的升高水平不如UHMWPE顆粒處理后明顯。
　　第二章 RANKL、OPG在hFOB1.19成骨細胞中的表達
　　目的:探討凝血酶和UHMWPE顆粒處理后h

5、FOB1.19成骨細胞中RANKL和OPG mRNA的表達差異。
　　方法:將hFOB1.19成骨細胞分別與凝血酶和UHMWPE顆粒共同培養(yǎng)，MTT法檢測凝血酶和UHMWPE顆粒對巨噬細胞的最佳濃度。將hFOB1.19細胞分為細胞+凝血酶組、細胞+UHMWPE顆粒組和對照組，用實時熒光定量PCR技術檢測經(jīng)三組hFOB1.19細胞中RANKL、OPG mRNA的表達差異及RANKL/OPG的表達比率。
　　結果:MTT法檢測凝

6、血酶和UHMWPE顆粒對hFOB1.19細胞的最佳濃度分別為50 U/ml和0.1 mg/ml。經(jīng)顆粒處理后的hFOB1.19細胞，其RANKL和OPG mRNA的表達水平均明顯高于其他兩組，P＜0.01，而凝血酶處理組RANKL和OPG mRNA的表達水平也明顯高于對照組，P＜0.01。RANKL/OPG比率，顆粒處理組同樣高于其他兩組，但凝血酶處理組與對照組之間無統(tǒng)計學差異(P＞0.05)。
　　結論:UHMWPE顆粒處理hF

7、OB1.19細胞后，RANKL、OPGmRNA表達明顯升高，RANKL/OPG比率增加。凝血酶處理hFOB1.19細胞后能促進細胞RANKL、OPG mRNA的表達，但作用不如UHMWPE顆粒明顯。
　　第三章 RANKL/RANK/OPG系統(tǒng)在感染界膜中的表達
　　目的:探討RANKL/RANK/OPG系統(tǒng)在感染界膜、無菌性松動界膜和正?；ぶ械谋磉_差異。
　　方法:收集17例感染界膜組織、26例無菌性松動界膜組織及

8、12例正?；そM織，用掃描電鏡及透射電鏡對三種組織進行微觀形態(tài)的觀察。用實時熒光定量PCR技術檢測三種組織中RANKL、RANK和OPG mRNA的表達差異，用免疫組化法和Western-blot法檢測三種組織中RANKL、RANK和OPG蛋白的表達差異。
　　結果:三種組織的微觀形態(tài)有明顯差異，掃描電鏡可見無菌性松動界膜表面廣泛分布磨損顆粒，感染界膜在透射電鏡下中可見到桿菌的存在。無菌性松動界膜組織中RANKL、RANK及OPG

9、 mRNA的表達均明顯高于其他兩組，P＜0.01。感染界膜中RANKL mRNA的表達較其在正?；ぶ猩险{(diào)，P＜0.05;但RANK、OPG mRNA在這兩種組織中的表達無統(tǒng)計學差異，P＞0.05。RANKL/OPG比率，無菌性松動界膜組(P＜0.01)與感染界膜組(P＜0.05)的RANKL/OPG比率均高于正?；そM。無菌性松動界膜組織中RANKL、RANK蛋白的表達均明顯高于其他兩組，P＜0.01。感染界膜中RANKL蛋白的表達較