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文檔簡介
1、目的:RhoA基因在多數腫瘤細胞中高表達,與腫瘤的發(fā)生發(fā)展密切相關,參與腫瘤細胞的凋亡、侵潤和轉移等過程。本實驗通過構建RhoA基因的腺病毒RNA干擾系統(tǒng),并聯(lián)合TNF-α藥物觀察誘導肝癌細胞的凋亡情況。一方面探討RhoA基因在肝癌細胞中的功能和作用,另一方面為腫瘤藥物聯(lián)合治療提供新的研究方向。
方法:在本實驗室已經構建RhoAsiRNA質粒的基礎上,構建RhoA一腺病毒siRNA--AdsiRNA-RhoA。制各的重組腺
2、病毒,.感染HepG2細胞,通過RT-PCR和Westernblot技術檢測重組腺病毒對HepG2細胞中RhoA基因表達的影響。單獨應用RhoA基因重組腺病毒以及聯(lián)合TNF-α分別作用于HepG2后,應用MTT法檢測HepG2細胞的增殖情況,TUNEL反應檢測HepG2細胞凋亡情況。
結果:根據酶切鑒定和序列分析,成功構建RhoA基因的腺病毒siRNA。通過腺病毒siRNA作用,Westemblot檢測顯示,RhoA蛋白表
3、達抑制率為7648%;RT-PCR結果顯示,mRNA轉錄水平降低74.46%。表明構建的siRNA腺病毒能明顯抑制RhoA基因的表達。使用RhoA基因的siRNA腺病毒并聯(lián)合TNF-α,MTT實驗檢測結果表明能夠有效抑制HepG2細胞生長和增殖;TUNEL檢測結果表明能使HepG2細胞凋亡明顯。
結論:本研究成功建立了RhoA基因的siRNA腺病毒,以及聯(lián)合細胞因子TNF-α,提高了TNF-α誘導肝癌凋亡的作用,為今后探討
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