HGF-C-Met信號轉導通路在結直腸癌同時性肝轉移中的作用.pdf

1、一.研究背景和研究目的
　　 結直腸癌是世界范圍內最常見的惡性腫瘤之一，約有14.5％的患者在初診時發(fā)現(xiàn)伴有同時性肝臟轉移，發(fā)生肝轉移的結直腸癌患者對常規(guī)治療效果不佳，導致其預后不良。更深入的探討和理解結直腸癌同時性肝轉移機制，將為研究更有效的治療方案提供生物學理論基礎。HGF/c-Met信號轉導通路系統(tǒng)在結直腸癌轉移過程中發(fā)揮了至關重要的作用。體外研究發(fā)現(xiàn)，HGF可促進體外生長的結直腸癌細胞的生長和運動。在HGF存在的狀態(tài)下，

2、Met能夠充分的將上皮細胞轉化為侵襲表型。臨床報道發(fā)現(xiàn)，Met在結腸腺瘤、結直腸癌和轉移癌組織中過表達，而在正常結腸組織中弱表達或不表達，這表明了Met表達是結直腸癌發(fā)展過程中的早期事件。HGF在結直腸癌原發(fā)灶和轉移灶中也能檢測出表達。但觀察到HGF在結直腸癌和正常組織中表達無顯著性差異，這表明HGF和Met增強轉移潛能的能力取決于Met過表達對HGF表達的敏感性。結直腸癌原發(fā)癌組織Met過表達水平與腫瘤分期、淋巴結轉移和肝轉移等臨床病

3、理因素相關。在臨床治療中，酪氨酸激酶受體抑制劑已被用于治療進展期結直腸癌（例如西妥昔單抗）。然而，耐藥性發(fā)生是常見的現(xiàn)象，HGF誘導的Met活性被證實是導致結直腸癌西妥昔單抗治療耐藥性發(fā)生的新機制。因此，聯(lián)合表皮生長因子受體抗體和Met抗體可能有效的提高進展期結直腸癌臨床治療效果，此研究已進入臨床前期試驗階段。以上這些研究發(fā)現(xiàn)提示，HGF/c-Met信號轉導通路系統(tǒng)在結直腸癌肝轉移發(fā)生發(fā)展過程中發(fā)揮重要的作用和有望成為新的治療靶點。

4、r>　　 然而，很少有研究涉獵HGF/c-Met信號轉導通路在結直腸癌同時性肝轉移中的作用機制。DiRenzo等報道c-Met的過表達與結直腸癌腫瘤分期不相關，肝轉移組織中c-Met表達水平明顯高于原發(fā)灶。但Zeng等指出c-Met表達水平與結直腸癌Duke's分期相關，肝轉移組織中c-Met表達水平低于原發(fā)癌組織。HGF被認為是間質細胞分泌的作用于調節(jié)Met活性的分泌因子，然而，其在其他實體癌組織的上皮癌細胞中也有發(fā)現(xiàn)。在結直腸癌相

5、關研究中，有報道顯示研究病例中部分結直腸癌組織中HGF無表達，另有報道則指出HGF在全部研究的結直腸癌組織中表達水平增高。這些爭論引發(fā)對HGF和Met靶向藥物臨床療效的不確定，因此該系統(tǒng)在結直腸癌和肝轉移發(fā)生發(fā)展中的作用機制仍需要更進一步的研究探討。
　　 二.臨床資料和方法
　　 從2001年6月至2010年6月在山東省腫瘤醫(yī)院住院新診斷的1557例結直腸癌患者資料庫中發(fā)現(xiàn)253例同時性肝轉移患者，其中僅有30例同時性

6、肝轉移患者同時接受原發(fā)癌和肝轉移癌根治性切除術，并保存了完整的臨床病理資料。本研究根據(jù)患者區(qū)域淋巴結轉移狀態(tài)將實驗組分為兩個亞組（伴區(qū)域淋巴結轉移/不伴區(qū)域淋巴結轉移）。實驗亞組Ⅰ（伴有區(qū)域淋巴結轉移）21例TxN1-2M1(肝)和實驗亞組Ⅱ（不伴有區(qū)域淋巴結轉移）9例TxN0M1(肝)。依據(jù)實驗亞組病例的狀況（年齡，性別，腫瘤浸潤深度，分化程度和腫瘤部位等因素）匹配相對應的對照亞組，實驗亞組Ⅰ（TxN1-2M1(肝））中每例患者依據(jù)匹

7、配原則各匹配1例TxN1-2M0患者和1例TxN0M0患者。實驗亞組Ⅱ（TxN0M1(肝））中每例患者依據(jù)匹配原則各匹配1例TxN0M0患者。81例結直腸癌患者被包含在此研究中。實驗組和對照匹配組匹配方式和臨床病理因素見表1。研究中51例無肝轉移的結直腸癌患者經(jīng)根治性手術后隨訪至少6個月，以排除是否伴有同時性肝轉移。所有病例手術前均未接受新輔助治療。本研究應用免疫組織化學(IHC)和實時逆轉錄聚合酶鏈反應(RT-PCR)方法，檢測原發(fā)腫

8、瘤組織（81例）、淋巴結轉移組織（42例）和肝轉移組織（30例）中HGF和Met的蛋白和mRNA表達水平。本研究設計遵守1975年《赫爾辛基宣言》中規(guī)定的倫理標準。
　　 三.結果
　　 1.HGF、Met在結直腸癌伴同時性肝轉移患者和結直腸癌無肝轉移患者原發(fā)癌中的表達。
　　 結直腸癌細胞HGF表達定位于細胞膜和細胞質。統(tǒng)計學分析HGF表達與各臨床病理因素無相關性。實驗亞組Ⅱ(TxN0M1)與其匹配對照組(Tx

9、N0M0)結直腸癌組織中HGF陽性表達率分別是67％(6/9)和56％(5/9)，兩組比較無統(tǒng)計學差異（P=0.734）。而在實驗亞組Ⅰ（TxN1-2M1(肝））與其匹配對照組（TxN11-2M0和TxN0M0）結直腸癌組織中HGF表達比較差別有統(tǒng)計學意義(P=0.003)，結直腸癌伴同時性肝轉移患者結直腸癌組織中HGF表達明顯高于結直腸癌無肝轉移患者。在所有結直腸癌患者中，30例肝轉移患者結直腸癌組織中21例(70％)HGF呈陽性表達

10、，21例伴有區(qū)域淋巴結轉移無肝轉移患者結直腸癌組織中9例(42.9％)HGF呈陽性表達，30例無區(qū)域淋巴結轉移無肝轉移患者結直腸癌組織中僅有9例(30％)HGF呈陽性表達，伴轉移組與不伴轉移組之間HGF表達比較差別有統(tǒng)計學意義（P=0.007）。
　　 結直腸癌細胞Met表達定位于細胞膜和細胞質。在臨床病理因素中，Met表達與淋巴結轉移分期具有相關性(r=0.381，P=0.000)。N2期淋巴結轉移的結直腸癌組織中Met表達強

11、度明顯高于N1和N0期的結直腸癌患者。實驗亞組Ⅱ(TxN0M1(肝）)與其匹配對照組(TxN0M0)結直腸癌組織中Met陽性表達率分別是89％(8/9)和67％(6/9)，兩組比較無統(tǒng)計學差異(P=0.436)。而在實驗亞組Ⅰ（TxN1-2M1(肝））與其匹配對照組（TxN1-2M0和TxN0M0）結直腸癌組織中Met表達比較差別有統(tǒng)計學意義(P=0.001)。結直腸癌伴淋巴結及同時性肝轉移患者（TxN1-2M1(肝））和結直腸癌伴淋巴

12、結轉移無肝轉移患者（TxN1-2M0）原發(fā)癌組織中Met表達明顯高于結直腸癌無轉移患者(TxN0M0)。結直腸癌伴淋巴結及同時性肝轉移患者（TxN1-2M1）和結直腸癌伴淋巴結轉移無肝轉移患者（TxN1-2M0）之間原發(fā)癌組織中Met表達無顯著差異。在所有結直腸癌伴同時性肝轉移患者的原發(fā)癌Met表達陽性率為90％(27/30)，結直腸癌伴淋巴結轉移無肝轉移患者的原發(fā)癌Met表達陽性率為86％(18/21)，結直腸癌無轉移患者原發(fā)癌Met

13、表達陽性率為50％(15/30)，三組之間有顯著差異(P=0.004)。
　　 2.結直腸癌患者原發(fā)癌和肝轉移癌組織中HGF和MetmRNA表達
　　 結直腸癌原發(fā)癌和肝轉移癌組織中HGF和Met蛋白表達水平和mRNA表達水平存在顯著相關性，原發(fā)癌組織中(HGF:r=0.600P=0.003;Met:r=0.724，P=0.001)，肝轉移癌組織中(HGF:r=0.523P=0.032;Met:r=0.439P=0.03

14、7)。
　　 實驗亞組Ⅱ（TxN0M1(肝））與其匹配對照組(TxN0M0)結直腸癌原發(fā)癌組織中HGF和MetmRNA表達比較無顯著差異(獨立t檢驗，HGF:P=0.855;Met:P=0.646)。實驗亞組Ⅰ(TxN1-2M1(肝）)與其匹配對照組（TxN1-2M0和TxN0M0）結直腸癌原發(fā)癌組織中HGF和MetmRNA表達比較差別有統(tǒng)計學意義(單因素方差分析，HGF:P=0.038;Met:P=0.0082)。
　　

15、 對照結直腸癌原發(fā)癌和其對應的肝轉移癌組織中HGF和MetmRNA表達水平無顯著差異。實驗亞組Ⅰ與實驗亞組Ⅱ之間也無統(tǒng)計學差異。然而，當仔細觀察每一配對癌組織中HGF和MetmRNA表達水平時，也發(fā)現(xiàn)一些配對原發(fā)癌和肝轉移癌組織中存在顯著差異表現(xiàn)。實驗亞組Ⅱ（TxN0M1(肝））與其匹配對照組(TxN0M0)結直腸癌原發(fā)癌和肝轉移癌組織中:對于HGFmRNA表達，4例原發(fā)癌與轉移癌表達水平相一致，另5例原發(fā)癌與轉移癌表達水平存在顯著差

16、異，其中4例結直腸癌患者肝轉移癌組織中HGFmRNA表達水平明顯高于其原發(fā)癌，1例患者肝轉移癌組織中HGFmRNA表達水平低于其原發(fā)癌（≥或＜20相對拷貝）;另對于MetmRNA表達，6例原發(fā)癌與轉移癌表達水平相一致，另3例原發(fā)癌與轉移癌表達水平存在顯著差異，2例結直腸癌患者肝轉移癌組織中MetmRNA表達水平明顯高于其原發(fā)癌，另有1例患者肝轉移癌組織中MetmRNA表達水平明顯低于其原發(fā)癌（≥或＜300相對拷貝）。實驗亞組Ⅰ（TxN1

17、-2M1(肝））與其匹配對照組(TxN2-2M0和TxN0M0)結直腸癌結直腸癌原發(fā)癌和肝轉移癌組織中:對于HGFmRNA表達，18例原發(fā)癌與轉移癌表達水平相一致，另3例原發(fā)癌與轉移癌表達水平存在顯著差異，另對于MetmRNA表達，17例原發(fā)癌與轉移癌表達水平相一致，另4例原發(fā)癌與轉移癌表達水平存在顯著差異。30例結直腸癌原發(fā)癌和其對應的肝轉移癌組織中，73.3％(22/30)例HGFmRNA表達水平一致，76.7％(22/30)例Me