神經病理性疼痛大鼠脊髓APC-Cdh1的表達變化.pdf

1、目的：
　　建立大鼠神經病理性疼痛模型并檢測大鼠脊髓APC-Cdh1的表達情況,從而探討其在神經病理性疼痛中樞敏化中的作用,為神經病理性疼痛的治療提供新的方向。
　　方法：
　　成年雄性SD大鼠54只,體重180-220g,隨機分為手術組(SNL組)、假手術組(Sham組)、空白組(Na?ve組),每組18只。SNL組沿L4-S1脊柱中線作一縱行切口,切除L5-L6關節(jié)突關節(jié)和L6橫突,游離L5神經周圍組織,在其遠端緊

2、緊結扎并剪斷。Sham組除了不結扎剪斷L5神經外,其余均同SNL組。Na?ve組則不作任何處理。
　　于術前3、1天,術后2、3、4、5、6、7天各時間點用vonFrey細絲測定大鼠左后足50％機械刺激縮足閾值。于術后第7天測定完機械痛閾后,將各組大鼠處死,取脊髓腰膨大。每組取6只采用鏈霉親和素-生物素復合物(streptavidin-biotincomplex,SABC)法檢測脊髓背角GFAP和c-Fos蛋白的表達;每組取6只大

3、鼠采用實時熒光定量PCR檢測脊髓內Cdh1的mRNA含量;每組取6只大鼠采用Wsternblot檢測脊髓內Cdh1及其相關蛋白的表達量。
　　結果：
　　1.大鼠50%機械刺激縮足閾值變化:三組大鼠手術前基礎50%機械刺激縮足閾值無統(tǒng)計學差異(P>0.05)。SNL組大鼠左后足50%機械刺激縮足閾值于術后第二天即開始顯著下降(P<0.05),一直持續(xù)到術后第七天,而Sham組和Na?ve組大鼠的50%機械刺激縮足閾值則沒有明

4、顯的變化。
　　2.SABC法檢測脊髓背角GFAP和c-Fos蛋白的表達:術后第7天免疫組織化學顯示SNL組大鼠左側脊髓背角的GFAP和c-Fos蛋白表達含量明顯增高,與Sham組和Na?ve組相比,差異具有統(tǒng)計學意義(P<0.05)。
　　3.實時熒光定量PCR檢測Cdh1的mRNA表達:與Sham組與Na?ve組相比,SNL組大鼠于術后第7天脊髓腰膨大內Cdh1mRNA的含量下降,差異有統(tǒng)計學意義(P<0.05)。

5、>　　4.Westernblot檢測Cdh1以及Cdh1相關蛋白APC2、Skp2的表達水平:與Sham組和Na?ve組相比,術后第7天SNL組大鼠脊髓腰膨大內Cdh1的表達水平下降,差異有統(tǒng)計學意義(P<0.05);而各組間APC2和Skp2的差異無統(tǒng)計學意義(P>0.05)。
　　結論：
　　將大鼠L5神經結扎并剪斷,可以成功地制備神經病理性疼痛模型,并能誘導脊髓背角GFAP和c-Fos蛋白的表達。神經病理性疼痛模型大鼠