信號肽和IL-4增強基于HEV中和表位（p179）基因疫苗誘導抗體應答的研究.pdf

1、戊型肝炎病毒(Fepatitis Evirus,FtEV)是無包膜的單正鏈RNA病毒，主要通過胃腸道傳播，是引發(fā)急性戊型肝炎(Hepatitis E，HE)的病原體。目前HE尚無特效的抗病毒治療藥物，因此，HEV疫苗在HE防治中的作用受到人們的重視，而誘導具有保護作用的中和抗體是HEV疫苗的關鍵。在以往的研究中，我們利用His融合靶抗原的原核表達技術、抗原mapping技術和基于PCR的體外中和試驗等發(fā)現(xiàn)，HEV中和抗原表位位于ORF2

2、編碼蛋白的第452至617位氨基酸之間，這為研制基于中和表位的HEV疫苗奠定了物質基礎。 基因疫苗因其具有制備簡單、性質穩(wěn)定，經濟以及由體內真核細胞表達的靶抗原具有與天然病毒抗原相似的構象結構等優(yōu)點，而受人們關注并已用于HEV疫苗的研究。為進行基于HEV中和表位基因疫苗的研究，我們曾去掉原p166 N端His-tag并構建p166編碼基因的真核表達載體，但實驗結果發(fā)現(xiàn)：這些真核表達載體不能有效表達p166多肽、也很難在小鼠體

3、內誘導明顯的抗體應答。為此，我們又以p166為基礎重新進行了抗原mapping試驗，結果證實：不同的表達載體以及目的基因的長短直接影響靶抗原在體內、體外的表達，最終我們成功發(fā)現(xiàn)了能在真核細胞有效表達的、最短的、含中和抗原表位的p166的同源序列多肽-p179(位于ORF2編碼蛋白第439-617位氨基酸)。 在本研究中，我們以pVAX為真核表達載體、HEV-ORF2<'439-617>(p179)為靶基因構建重組質粒，以肌肉