運動性疲勞大鼠心室肌蛋白質組差異性表達的研究.pdf

1、本研究采用蛋白質組學的理論與技術，建立安靜和遞增運動負荷訓練后大鼠心室肌蛋白質組的差異性表達圖譜，初步篩選出對運動應激具有重要意義的心室肌目標蛋白質，從蛋白質組學定量與定性研究的角度探討運動性心肌疲勞的發(fā)生規(guī)律。 以10只雄性SD大鼠為研究對象，隨機分為對照組和運動實驗組，運動組經過7周大強度遞增運動負荷訓練后(最后一次力竭)6小時和對照組同時麻醉處死，提取心室肌組織的全蛋白樣品。采用雙向凝膠電泳進行蛋白樣品分離，經考馬斯亮藍G

2、-250染色后，采用PD-Quest軟件進行圖像分析和數(shù)據(jù)采集。選擇運動后“缺失”和差異性表達量在5倍以上的目標蛋白質點進行膠內原位酶解和質譜鑒定。 實驗結果表明，對照組和運動組樣品蛋白質點的平均匹配率分別為79％±10.46％和77.1％±8.23％，平均相關系數(shù)為0.73，獲得了重復性較好雙向考染圖譜。對照組與運動組蛋白質點數(shù)目分別為352±17和338±17個。運動后表達差異的點共有99個，運動后消失的點有5個；上調和下調

3、5倍及5倍以上的各有12個；表達量上調2倍及以上的有52個，下調2倍及以上的有42個。9個目標蛋白點共鑒定出7個蛋白質：運動后“缺失”的蛋白質有心肌特異性長鏈脂酰輔酶A脫氫酶、線粒體電子傳遞鏈復合體I最大的亞基、葡萄糖調節(jié)蛋白75、原肌球蛋白1α鏈；運動后表達上調的蛋白質有腈水解酶家族成員2；運動后表達下調的蛋白質有心肌α-肌球蛋白重鏈和一個分子量為21KDa的未知蛋白。在長時間大強度的運動應激條件下，大鼠的心室肌中的蛋白質組發(fā)生了顯著

4、的變化。運動后“缺失”和下調的蛋白質點與心肌收縮的調控失衡和能量代謝的方式轉變，以及細胞的應激反應有關，表明遞增運動負荷訓練后，心肌疲勞的發(fā)生與心肌收縮力的下降、能量供給困難和心肌細胞的損傷有關。 值得重視的是，采用蛋白質組學的方法，成功地篩選出心肌特異性長鏈脂酰輔酶A脫氫酶和葡萄糖調節(jié)蛋白75等6種在運動醫(yī)學領域中尚未涉足的，具有運動應激特點的，對研究運動心臟具有重要意義的目標蛋白質，為深入研究運動性心肌疲勞提供了新的思路，奠