基于16SrRNA基因的食源性致病菌的實時熒光PCR檢測研究.pdf_第1頁
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文檔簡介

1、近年來食品安全事件頻發(fā)使得食品安全已經(jīng)成為了全民關注的共同話題。食品安全問題成為關系到各個層次的人的民生問題，而在各類食品安全事件中，由食源性致病菌引起的食物中毒是食品安全問題的主要方面。
　　最常見的食源性致病菌有志賀氏菌(Shigella)、沙門氏菌(Salmonella)和金黃色葡萄球菌(Staphylococcus aureus)等。目前國內對食源性致病菌的檢測方法主要沿用傳統(tǒng)的細菌分離培養(yǎng)鑒定法，其檢測過程復雜瑣碎，耗時

2、太長，不僅靈敏度不高，且每次只能確定或排除一種病原菌，難以滿足對食源性致病菌快速準確檢測的需要。因此，建立一種多重、快速、高效的檢測技術是十分必要的。
　　本研究利用TaqMan探針技術建立了針對志賀氏菌(Shigella)、沙門氏菌(Salmonella)和金黃色葡萄球菌(Staphylococcus aureus)這三種主要食源性致病菌的多重實時熒光PCR檢測技術。利用16SrRNA基因作為靶基因設計熒光定量PCR引物和Taq

3、Man探針，引物和探針雙重控制靶基因的選擇，具有很好的特異性和靈敏度。研究結果：
　　（1）選取細菌16SrRNA基因作為靶基因，設計PCR引物，以志賀氏菌、沙門氏菌和金黃色葡萄球菌三種菌為目標菌，六種菌為對照菌，通過普通PCR擴增及測序驗證，該引物可以作為兼并引物用于進一步研究。
　?。?）優(yōu)化建立針對單一細菌基因檢測的單一實時熒光定量PCR檢測體系，在單一實時PCR檢測體系的基礎上進一步優(yōu)化建立了三重實時熒光PCR檢測體

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