桑根皮素對人肝癌細胞和肺癌細胞的抑制作用及其機制探討.pdf

1、本實驗以湖桑32號栽培桑的桑枝條皮中提取到的桑根皮素為研究對象，通過小鼠的毒理試驗和觀察桑根皮素對二種人肝癌和肺癌細胞生長的影響，研究了桑根皮素對人肝癌細胞Bel-7402和人肺癌細胞A549增殖的抑制作用和凋亡誘導作用，并初步探討其作用機制，為蠶桑產(chǎn)業(yè)的最大廢棄物—桑枝資源的綜合利用和生物活性物質(zhì)—桑根皮素藥用研發(fā)以及臨床應用研究提供必要的理論和實驗依據(jù)。
　　本文的研究主要涉及以下內(nèi)容：
　?。?）本文進行了桑根皮素對正

2、常小鼠的毒性試驗。采用腹腔注射的方式，用桑根皮素處理正常ICR小鼠，調(diào)查了桑根皮素對正常小鼠生長與發(fā)育的影響。動物實驗結(jié)果表明，桑根皮素以40 mg/kg劑量皮下注入小鼠后，樣品處理組的小鼠體重略有下降，肝臟指數(shù)和肺臟指數(shù)也有增大，但是與正常組相比，統(tǒng)計學分析上沒有顯著性差異。同時小鼠血清中GOT和GPT兩種肝功能指標的活性也與正常組沒有顯著性差異。觀察小鼠肝臟和肺臟HE染色切片，可以發(fā)現(xiàn)桑根皮素處理組小鼠肝臟沒有明顯的損傷，但是對肺臟

3、有輕微的副作用。但綜合上述結(jié)果可以得出，皮下注射桑根皮素對正常小鼠的生長和發(fā)育沒有明顯的毒性作用，但是對小鼠的肺臟還是有一定程度的損傷。
　　（2）本文研究了桑根皮素對人肝癌細胞Bel-7402的抑制作用。實驗分為空白對照組（模型組）和不同濃度的桑根皮素處理組（10μg/ml、50μg/ml和100μg/ml），分別研究了桑根皮素對細胞的增殖、凋亡、抗氧化水平以及腫瘤相關基因表達水平的影響。實驗結(jié)果顯示，桑根皮素濃度50μg/ml

4、和100μg/ml時，作用于Bel-7402細胞24 h后，可顯著抑制腫瘤細胞的增殖，降低存活率，與空白對照組相比有顯著差異；倒置顯微鏡下可觀察到細胞皺縮、數(shù)目顯著減少等細胞凋亡的癥狀；流式細胞術(shù)分析可知，10μg/ml、50μg/ml和100μg/ml桑根皮素處理細胞后，這種腫瘤細胞的凋亡率分別是19.86％、68.2%和81.00%，并且線粒體膜電位也隨著桑根皮素濃度的增加而降低；抗氧化酶活性分析表明，桑根皮素可誘導 Bel-740

5、2細胞抗氧化活力的增加；ELISA分析結(jié)果顯示，桑根皮素處理后可下調(diào)NF-?B表達和上調(diào)Caspase-3、Caspase-9的表達；Western Blotting結(jié)果分析表明，桑根皮素處理可上調(diào)P-ERK1/2和P-JNK表達，通過MAPK途徑誘導細胞凋亡；RT-PCR實驗結(jié)果表明，桑根皮素可誘導細胞內(nèi)抑癌基因Beclin-1、P53和NF-B(p65)的表達上調(diào)，從而達到抑制腫瘤增殖的作用。因此，桑根皮素可通過線粒體途徑和 MAP

6、K途徑等細胞凋亡的途徑，誘導人肝癌細胞 Bel-7402細胞發(fā)生凋亡，進而達到抗腫瘤的作用。
　　（3）本文還研究了桑根皮素對人肺癌細胞 A549細胞的抑制作用。實驗分為空白對照組和三種不同濃度的桑根皮素處理組（10μg/ml、50μg/ml和100μg/ml），分別研究了桑根皮素對這種腫瘤細胞的增殖、遷移、凋亡、抗氧化水平以及腫瘤相關基因表達水平的影響。實驗結(jié)果顯示，桑根皮素濃度為50μg/ml和100μg/ml時，作用于A54

7、9細胞24 h后，可顯著降低其存活率，與空白對照組相比有顯著差異，倒置顯微鏡下可同樣觀察到細胞皺縮、數(shù)目明顯減少等細胞凋亡癥狀；劃痕愈合實驗結(jié)果表明，不同濃度的桑根皮素可顯著降低肺癌細胞的遷移速率；流式細胞術(shù)分析可知，以10μg/ml、50μg/ml和100μg/ml三個劑量的桑根皮素處理細胞后，細胞的凋亡率分別為16.46%、55.80%和70.80%；并且線粒體膜電位也隨著濃度的增加而降低；抗氧化酶活性分析表明，桑根皮素可誘導A54