SEMG1、SEPT12基因與弱精子癥的相關性研究.pdf

1、目的：檢測精囊凝膠蛋白1（SEMG1）、胞裂蛋白12（SEPT12）基因在弱精子癥（Asthenozoospermia, AZS）患者和正常對照精子中mRNA的表達，分析SEMG1、SEPT12基因與弱精子癥的相關性。
　　方法：收集成年男性正常對照組和弱精子癥組精液樣本各40例，采用Percoll密度梯度分離液純化精子，提取精子RNA并將其逆轉錄為cDNA。采用實時定量RT-PCR（qRT-PCR）的方法，分別以對照組和弱精子癥

2、組精子的cDNA為模板，設計SEMG1、SEPT12基因的特異性擴增引物進行PCR擴增，比較兩組精子中SEMG1、SEPT12基因mRNA表達差異。
　　結果：通過qRT-PCR進行目的基因和內參基因的擴增，分別獲得特異性擴增條帶， SEMG1目的基因片段為163bp，SEPT12目的基因片段為167bp，內參基因GAPDH目的片段為189bp。對兩樣本組目的基因的相對表達量采用獨立樣本t檢驗分別進行統(tǒng)計分析。結果顯示：1. AZ

3、S組SEMG1基因的mRNA表達水平（1.98±0.24）顯著高于對照組（1.05±0.35），差異具有統(tǒng)計學意義（P<0.05）；2. AZS組SEPT12基因的mRNA表達水平（0.36±0.14）顯著低于對照組（1.03±0.25），差異具有統(tǒng)計學意義（P<0.05）。
　　結論：1.精囊凝膠蛋白1基因（SEMG1）在弱精子癥精子中表達上調，可能與AZS的發(fā)生有關；2.胞裂蛋白12基因（SEPT12）在弱精子癥精子中表達顯著

4、降低，可能參與AZS的發(fā)生。
　　第二部分：SEMG1、SEPT12基因的多態(tài)性研究
　　目的：應用KASP（Kompetitive Allele-Specific PCR）高通量SNP（Single nucleotide polymorphism）檢測技術對SEMG1基因的rs16989820位點、rs2301366位點，及SEPT12基因的rs759991位點、rs6500634位點進行檢測，初步探討這四個位點的多態(tài)性與

5、河南弱精子癥患者的相關性，為弱精子癥的診斷和治療提供相關的理論依據(jù)。
　　方法：收集276例正常成年男性精液樣本作為對照組，276例弱精子癥患者精液樣本作為病例組，提取精子基因組DNA，通過KASP高通量SNP檢測技術對SEMG1基因的rs16989820位點、rs2301366位點，及SEPT12基因的rs759991位點、rs6500634位點進行基因分型。隨機選取各位點不同基因型個體的PCR擴增產物進行DNA測序驗證。

6、>　　結果：1.SEMG1基因的rs16989820位點、rs2301366位點和SEPT12基因的rs759991位點、rs6500634位點在弱精子癥組和對照組中的基因型分布頻率符合Hardy-Weinberg平衡（P值均大于0.05），表明樣本具有良好的人群代表性；2. SEMG1基因的rs16989820位點和rs2301366位點其等位基因和基因型頻率在對照組和弱精子癥組分布差異均無統(tǒng)計學意義（P>0.05）；3. SEPT1

7、2基因rs759991位點在弱精子癥組和對照組間的等位基因和基因型頻率分布差異顯著，具有統(tǒng)計學意義（P<0.05），攜帶T等位基因和TT基因型個體發(fā)生弱精子癥的風險增高（ P=0.007， OR=1.413，95％CI：1.098-1.818;P=0.021， OR=1.891，95%CI：1.097-3.261）；4. SEPT12基因rs6500634位點在弱精子癥組和對照組間T等位基因頻率分布差異顯著，具有統(tǒng)計學意義，攜帶T等位基

8、因的個體發(fā)生弱精子癥的風險降低（P=0.030，OR=0.661，95%CI：0.454-0.963）；5. SEPT12基因rs759991和rs6500634位點的單倍型結果顯示，攜帶C-T單倍型的個體可降低弱精子癥的發(fā)生風險（P=0.006，OR=0.431，95%CI：0.233-0.798），而攜帶T-C單倍型的個體可增加弱精子癥的發(fā)生風險（P=0.002，OR=1.549，95%CI：1.180-2.033）。
　　結