丹參調節(jié)AQP1效應與其改善微循環(huán)障礙（水瘀）的關系研究.pdf

1、研究背景：
　　血瘀即是離經之血未能及時排出或消散，停留于體內；或血液運行不暢，積于臟腑、器官、組織之內，失去正常生理功能而產生的證候，即為血瘀證。
　　傳統(tǒng)中醫(yī)理論認為血瘀的產生與血與脈兩個因素密切相關。一、血液滋潤與濡養(yǎng)功能的發(fā)揮易受到寒、熱、氣滯、氣虛等因素的影響，故《靈樞本藏》有“血和則經脈流行”的論述。此外傳統(tǒng)中醫(yī)尚有“津血同源”“汗血同源”“精血同源”等觀點，認為汗液、津精液等可以互化互生。因此我們認為血瘀在一定

2、程度上伴有水液停聚。二、“脈者，血之府”《素問脈要精微論》，脈既是血液化生的場所，又是血液運行的通道，因此脈道通利與否是血液能否暢通的前提和保證。
　　現(xiàn)代研究證實微循環(huán)障礙有微血流異常（血），可改變微血流狀態(tài)，使血液“粘稠”，而呈現(xiàn)血瘀的病理表現(xiàn)；其次存在微血管內皮細胞損傷（脈），血管內皮細胞（Vascular endothelial cell，VEC）是組織半透膜、襯貼于血管內側面，屬“脈”重要組成、與血緊密接觸，對內環(huán)境穩(wěn)定

3、、組織血供與代謝調控非常重要。血管內皮細胞的損傷可以導致血管通透性改變，使血漿蛋白滲入組織間隙，組織液膠體滲透壓升高，造成“水積”，即血瘀兼“水積”象，這與中醫(yī)的“津血同源”“汗血同源”“精血同源”觀點不謀而合。而以往治療血瘀證多注重于血而忽視脈道損傷導致的水積，故本課題提出“水瘀”概念，創(chuàng)建“活血利水”法，并將其分為“活血消腫”和“活血利尿”兩個方面在肺、腎組織體現(xiàn)。在《素問?調經論篇》“病在脈、調之血，病在血、調之絡”理論指導下，將

4、VEC作為改善微循環(huán)障礙的效應位點。
　　水通道（Aquaporin，AQP）是一種與水通透性（吸收、分泌、轉運）有關的細胞膜糖蛋白，維持細胞內外水平衡，AQP1選擇性分布于內皮細胞（VEC）、上皮細胞等，在肺、腎組織均有表達。實驗證實 AQP1在血管生成和細胞遷移中發(fā)揮重要作用，AQP1有助于VEC修復。故AQP1可以作為“活血利水”法辨治微循環(huán)障礙的新指標。
　　丹參作為傳統(tǒng)的活血藥，本文冀以探討丹參是否可通過保護VEC

5、以改善微循環(huán)障礙以及對AQP1的調節(jié)效應的關系進行研究。
　　第一部分：丹參對急性微循環(huán)障礙大鼠血管內皮細胞的保護作用
　　目的：1、驗證鹽酸腎上腺素及冰水刺激造成急性微循環(huán)障礙大鼠即血瘀證模型造模成功。
　　2、觀察血瘀證相關參數(shù)變化，驗證丹參通過保護內皮細胞以改善微循環(huán)障礙。
　　方法：50只SD雄大鼠隨機分為兩組，正常組10只，模型組40只，模型組采用腹部皮下注射鹽酸腎上腺素和冰水泳刺激。造模成功的再分為：

6、正常組、模型組、西藥對照組、丹參低劑量、丹參中劑量組、丹參高劑量組。觀察各組大鼠精神、毛發(fā)、舌質顏色等基本狀態(tài)，剃耳部毛在微循環(huán)儀器檢測耳部微小血管血液循環(huán)狀態(tài)及檢測血液粘度和紅細胞變形能力確認微循環(huán)障礙即血瘀證模型造模成功；ELISA法檢測大鼠血清中血管內皮素（ET-1）、P-選擇素（P-Selection）、血管內皮生長因子（VEGF）含量。
　　結果：丹參可以明顯改善大鼠耳部微循環(huán)障礙并降低大鼠血液粘度；丹參顯著減少ET-1

7、、P-Selection、VEGF的含量。
　　結論：丹參可以改善大鼠微循環(huán)障礙其機制與通過改善內皮細胞結構或者功能有關，并驗證血管內皮細胞為血瘀證的效應位點。
　　第二部分：丹參改善急性微循環(huán)障礙大鼠肺損傷及對肺組織AQP1調節(jié)作用
　　目的：通過丹參對于微循環(huán)障礙大鼠肺組織損傷的改善及對 AQP1表達的調節(jié)，驗證丹參通過上調肺組織內皮細胞上 AQP1的表達來減輕微循環(huán)障礙大鼠肺組織損傷及肺水腫。
　　方法：取

8、大鼠肺組織進行肺水腫參數(shù)的檢測，肺濕/干比(W/D)和右肺/體重之比(R/B)；HE染色法觀察各組肺組織病理形態(tài)學變化；用Western blot檢測方法分析各組大鼠肺組織 AQP1的表達；運用免疫組織化學檢測方法檢測各組大鼠肺組織的AQP1表達。
　　結果：肺濕/干比及右肺/體重之比提示：和正常組相比，模型組均顯著升高(P<0.05)丹參中劑量、丹參高劑量和模型組相比均降低(P<0.05)；HE染色結果：模型組具有急性肺組織損傷

9、的表現(xiàn)，丹參具有明顯的改善作用且隨著劑量的增加肺組織結構越趨于正常；AQP1表達：在肺組織中，丹參低、中、高劑量組較模型組表達量均升高，且隨著丹參劑量增高表達量增加明顯。
　　結論：丹參通過上調肺組織 AQP1的表達來減輕微循環(huán)障礙大鼠急性肺組織損傷及肺水腫，并驗證“血瘀證”亞型“水瘀”存在假說。
　　第三部分：丹參改善急性微循環(huán)障礙大鼠腎損傷及對腎組織AQP1調節(jié)作用
　　目的：通過丹參對微循環(huán)障礙大鼠腎組織損傷的改

10、善及對AQP1表達的調節(jié)，驗證丹參通過上調AQP1表達改善微循環(huán)障礙大鼠腎損傷所致的水液代謝障礙。
　　方法：HE染色法觀察各組腎組織病理形態(tài)學變化；用Western blot檢測方法分析各組大鼠腎組織AQP1的表達；運用免疫組織化學檢測方法檢測各組大鼠腎組織的AQP1表達。
　　結果：HE染色結果：模型組具有腎損傷的表現(xiàn)，丹參具有明顯的改善作用且隨著劑量的增加腎組織結構及功能越趨于正常；AQP1表達：在腎組織中，丹參低、中

11、、高劑量組較模型組表達量均升高，且隨著丹參劑量增高表達量增加明顯。
　　結論：丹參改善微循環(huán)障礙大鼠腎損傷所致的水液代謝障礙與通過上調 AQP1表達有關，體現(xiàn)“活血利水”法在“水瘀”病癥治療中的重要性。
　　小結：
　　1、證實鹽酸腎上腺素及冰水泳刺激大鼠血瘀證模型有微循環(huán)障礙表現(xiàn)。
　　2、丹參通過降低血清 ET-1、P-selection、VEGF含量保護血管內皮細胞以改善微循環(huán)障礙，并驗證血管內皮細胞為血瘀