SFRP5沉默促進(jìn)人胰腺癌細(xì)胞PANC-1與CFPAC-1惡性表型的研究.pdf

1、目的：探討慢病毒介導(dǎo)的shRNA沉默SFRP5基因?qū)θ艘认侔┘?xì)胞PANC-1與CFPAC-1惡性表型的影響。
　　方法：將靶向SFRP5基因特異性shRNA慢病毒載體轉(zhuǎn)染人胰腺癌細(xì)胞系PANC-1與CFPAC-1，設(shè)立空白質(zhì)粒轉(zhuǎn)染兩組細(xì)胞后作為陰性對(duì)照組，未處理細(xì)胞做為空白對(duì)照組。在熒光倒置顯微鏡下觀察實(shí)驗(yàn)組與陰性對(duì)照組的細(xì)胞轉(zhuǎn)染效率；應(yīng)用real-time PCR及western blot檢測(cè)轉(zhuǎn)染前后胰腺癌細(xì)胞中SFRP5RNA

2、以及蛋白的表達(dá)；CCK-8實(shí)驗(yàn)檢測(cè)胰腺癌細(xì)胞增殖能力；使用Transwell小室實(shí)驗(yàn)分析胰腺癌細(xì)胞侵襲能力；細(xì)胞劃痕實(shí)驗(yàn)分析胰腺癌細(xì)胞遷移能力。
　　結(jié)果：熒光倒置顯微鏡下觀察實(shí)驗(yàn)組與陰性對(duì)照組細(xì)胞轉(zhuǎn)染效率均在80％以上，細(xì)胞傳代48h后，綠色熒光蛋白表達(dá)效率未見明顯下降；real-time PCR和western-blot檢測(cè)結(jié)果均表明成功建立穩(wěn)定轉(zhuǎn)染shRNA-SFRP5胰腺癌PANC-1、CFPAC-1細(xì)胞株；CCK8實(shí)驗(yàn)結(jié)

3、果顯示，SFRP5病毒轉(zhuǎn)染組與陰性對(duì)照組及空白對(duì)照組相比細(xì)胞的增殖能力明顯增加（P<0.01），陰性對(duì)照組與空白對(duì)照組間無(wú)明顯差異；Transwell小室實(shí)驗(yàn)及細(xì)胞劃痕結(jié)果顯示SFRP5病毒轉(zhuǎn)染組的細(xì)胞遷移能力明顯高于陰性對(duì)照組及空白對(duì)照組（P<0.01），陰性對(duì)照組與空白對(duì)照組間無(wú)明顯差異。
　　結(jié)論：SFRP5慢病毒干擾載體能有效抑制SFRP5基因在人胰腺癌PANC-1與CFPAC-1細(xì)胞中的表達(dá)，SFRP5可顯著抑制胰腺癌細(xì)