CTP-NPRL2融合蛋白對腎癌原代細胞遷移侵襲能力的影響.pdf

1、目的：
　　將原核表達的NPRL2（Nitrogen permease regulator2-like）融合蛋白通過胞漿轉導肽（Cytoplasmic transduction peptide，CTP）轉入到腎癌原代細胞胞漿內，觀察其對腎癌原代細胞遷移侵襲能力的影響，并觀察其與腎癌的上皮間質轉化(epithelial-mesenchymal transition,EMT)的關系。
　　方法：
　　分別使用IV型膠原酶消

2、化與在濾網上研磨的方法培養(yǎng)腎癌原代細胞；構建原核表達質粒pET15b-CTP-NPRL2和pET15b-NPRL2，表達融合蛋白CTP-NPRL2和NPRL2，并通過western blot鑒定融合蛋白的表達。通過免疫熒光實驗檢測融合蛋白的定位情況；通過遷徙侵襲實驗檢測導入融合蛋白后，對腎癌原代細胞的影響；Real-Time PCR檢測Raptor、E-cadherin、Vimentin、Fibronectin mRNA表達水平；Wes

3、tern Blot檢測Raptor、E-cadherin、Vimentin、Fibronectin蛋白表達水平。
　　結果：
　　培養(yǎng)出腎癌原代細胞并通過流式細胞術與免疫組化鑒定；Western Blot結果提示重組質粒成功表達出目的融合蛋白；免疫熒光提示CTP-NPRL2融合蛋白可以穿過胞膜并定位于胞漿；遷移和侵襲實驗顯示CTP-NPRL2組腎癌細胞遷移侵襲能力明顯降低；Real-Time PCR和Western Blot

4、顯示CTP-NPRL2組 Raptor、Vimentin與 Fibronectin的mRNA、蛋白表達水平與NPRL2組和BLANK組相比降低（P＜0.05），而E-cadherin的mRNA、蛋白表達水平與NPRL2組與BLANK組相比升高（P＜0.05）。
　　結論：
　　NPRL2可以影響腎癌原代細胞遷移能力，可能是通過對Raptor表達的影響，改變mTORC1活性，進而調節(jié)EMT相關蛋白的表達量，改變了EMT進程，進