PPD12逆轉ABC跨膜轉運蛋白介導的癌細胞多藥耐藥.pdf

1、目的：原人參二醇（protopanaxadiol，PPD）能夠抑制ATP結合膜蛋白B1（ATP-Binding Cassette Sub-Family B Member1，ABCB1）轉運體，發(fā)揮逆轉耐藥的作用。課題組前期通過組合化學手段改造PPD的化學結構，合成新的PPD系列衍生物。本研究對PPD衍生物逆轉腫瘤耐藥的效果進行評價，并闡明其對腫瘤耐藥的調控機制，為腫瘤的治療提供有效的增敏藥物。
　　方法：選取耐藥與相應不耐藥腫瘤細

2、胞株2對，檢測細胞株中ABCB1的mRNA和蛋白表達水平；MTT比色法檢測PPD衍生物對腫瘤耐藥細胞及其母本的半數(shù)抑制濃度（half inhibitory concentration，IC50）；聯(lián)合應用化療藥物，檢測PPD衍生物的逆轉倍數(shù)；過表達外源性ABCB1后，分析PPD衍生物的逆轉效果；檢測PPD衍生物對其余ABC轉運體活性的抑制活性；激光共聚焦顯微鏡定性觀察細胞中藥物的變化，流式細胞儀和熒光分光光度儀定量分析細胞中藥物濃度的變

3、化；細胞流出實驗和ATPase活性實驗驗證PPD12對ABCB1的調控作用；裸鼠皮下成瘤，觀察PPD衍生物與化療藥物聯(lián)合應用對腫瘤生長的抑制作用。TUNEL和H&E染色檢測瘤體組織的變化。
　　結果：
　　（1）ABCB1的轉錄和翻譯水平在腫瘤耐藥細胞株中表達顯著上調。PPD衍生物（PPD，PPD11，PPD12）對腫瘤耐藥細胞的IC50均大于6μM；
　　（2）5μM PPD12與阿霉素聯(lián)用后，阿霉素對KB/VCR的

4、IC50降低了12.92倍，逆轉活性高于5μM的PPD和PPD11。5μM PPD12對順鉑（不是ABCB1轉運體底物）的逆轉活性弱。在MCF-7/ADM和HEK293/ABCB1細胞中，PPD12對阿霉素的逆轉作用強于PPD和PPD11。在ABCC1高表達細胞HL60/ADR和ABCG2高表達細胞S1-Mi-80中，PPD12的增敏作用較弱；
　?。?）激光共聚焦和流失檢測顯示，PPD12增加了阿霉素細胞內的累積量，減緩了阿霉素