靶向損毀觸液神經元對內源性神經干細胞增殖的影響.pdf

1、目的：
　　觀察靶向損毀觸液神經元后脊髓損傷大鼠內源性神經干細胞的增殖情況，探討脊髓損傷后觸液神經元對內源性神經干細胞增殖的影響，為內源性神經干細胞治療脊髓損傷提供新的思路。
　　方法:
　　取60只成年雌性SD大鼠隨機分成兩組：損毀組即CB-SAP組（側腦室注射觸液神經元靶向損毀劑CB-SAP），對照組即CB組（側腦室注射觸液神經元靶向損毀劑耦合載體CB），參照《大鼠腦立體坐標圖譜》于大鼠腦立體定位儀上向左/右側腦室

2、緩慢注射，側腦室注射后不同時間點各隨機選取兩只大鼠處死，取胸10上下各0.5cm節(jié)段脊髓組織，冰凍切片，免疫熒光技術檢測CB陽性神經元殘留情況，即觸液神經元損毀情況；靶向損毀成功后兩組均造胸10脊髓損傷，于脊髓損傷后不同時間點每組各隨機選取兩只大鼠處死，取胸10上下各0.5cm節(jié)段脊髓組織，冰凍切片，免疫熒光檢測脊髓Nestin表達情況，并以圖像軟件分析比較不同時間點的Nestin表達光密度，以BBB評分測定功能學情況。
　　結果

3、：
　　CB-SAP側腦室注射第1d時與CB標記效果基本相同，但隨時間延續(xù)，脊髓組織CB-SAP標記細胞數量逐漸減少，細胞輪廓模糊，至2w時大部分消失。CB-SAP組可見脊髓損傷術后第1d Nestin表達增加，3d至1w達高峰期，后逐漸下降，至2w左右只有少量表達，4w左右時稍有回增；CB組中術后第1d出現少量Nestin表達，并持續(xù)至1w左右表達無明顯增多，隨后逐漸增多，2w至4w為高峰期。兩組間比較1d、3d、2w、4w點差

4、異有統(tǒng)計學意義（P<0.05），1w點差異無統(tǒng)計學意義，CB-SAP組高峰期出現時間較CB組提前。
　　結論：
　　側腦室注射CB和CB-SAP均可很好的逆行示蹤觸液神經元，且標記效果基本相同，側腦室注射CB-SAP可靶向損毀觸液神經元，但至2周左右時仍未完全消失，這也是本實驗的不足之處，其損毀效果有待進一步研究；大鼠脊髓損傷后隨時間延長神經功能可得部分恢復，但觸液神經元損毀組與未損毀組比較脊髓損傷后行為學無明顯差異，不能明