缺氧誘導(dǎo)因子1α-腎損傷分子1通路對高糖誘導(dǎo)腎小管上皮細胞細胞外基質(zhì)的影響.pdf

1、目的：糖尿病腎?。―N）是糖尿病(DM)發(fā)病率較高的微血管并發(fā)癥之一,同時也是導(dǎo)致終末期腎臟病（end stage renal disease，ESRD）的主要原因，而進行性腎間質(zhì)纖維化（RIF）則是DN進展的重要病理基礎(chǔ)。但其RIF的發(fā)生機制至今尚未完全闡明。因此，尋找更有效的預(yù)防糖尿病腎病的發(fā)生以及延緩其腎功能進展的措施已成為醫(yī)學(xué)界亟待解決的問題。國內(nèi)外相關(guān)研究表明，缺氧誘導(dǎo)因子1α(HIF1α)可與腎損傷分子1(KIM1)啟動子區(qū)

2、缺氧反應(yīng)原件結(jié)合并激活KIM1的表達。HIF1α、KIM1均與糖尿病腎病等慢性腎臟疾病腎間質(zhì)纖維化的發(fā)生密切相關(guān)。但DN中有關(guān)HIF1α-KIM1信號通路的相關(guān)研究甚少。本研究采用體外高糖培養(yǎng)人近端腎小管上皮細胞（HK2），觀察HIF1α、KIM1及細胞外基質(zhì)相關(guān)指標基質(zhì)金屬蛋白酶9（MMP9）、金屬蛋白酶1組織抑制物（IMP1）、纖連蛋白（fibronectin，F(xiàn)N）以及I型膠原蛋白（COL-I）的表達情況，并應(yīng)用siRNA轉(zhuǎn)染技術(shù)

3、分別下調(diào)HIF1α、KIM1的表達后，觀察細胞 MMP9、TIMP1、FN及 COL-I的變化，旨在探討HIF1α-KIM1信號通路在糖尿病腎病RIF中的作用。
　　方法：體外培養(yǎng)HK2并進行如下分組：HK2于含10％FBS的低糖（D-葡萄糖5.6 mmol/L）DMEM培養(yǎng)基，37℃、5％CO2貼壁培養(yǎng)。0.25％胰酶消化，1︰3傳代，待其生長至70％～80％融合時，使用無血清培養(yǎng)基同步12 h后隨機分為以下6組：正常對照組；甘

4、露醇組；高糖組；轉(zhuǎn)染對照組；HIF1αsiRNA組；KIM1 siRNA組。(其中正常對照組培養(yǎng)條件為D-葡萄糖5.6 mmol/L，甘露醇組培養(yǎng)條件為D-葡萄糖5.6 mmol/L+D-甘露醇24.4 mmol/L，高糖組培養(yǎng)條件為D-葡萄糖30 mmol/L)。分別于12h、24h、36 h各時間點收獲細胞。分別于不同培養(yǎng)時間條件下進行測定。應(yīng)用Western印跡法、實時熒光定量PCR法(qRT-PCR)和細胞免疫熒光方法檢測細胞H

5、IF1α、KIM1、MMP9、TIMP1、FN及COL-I的蛋白及mRNA表達。
　　結(jié)果：與正常對照組相比，高糖組細胞HIF1α、KIM1、TIMP1、FN及COL-I的蛋白及mRNA表達呈時間依賴性增加（P﹤0.05)；MMP9蛋白及mRNA表達呈時間依賴性減少（P﹤0.05）；與高糖組相比，HIF1αsiRNA組細胞HIF1α、KIM1、TIMP1、FN及COL-I的蛋白及mRNA表達明顯減少（P﹤0.05），MMP9蛋白及