基于補腎益精法復方的黃芪甲苷對硬皮纖維化的作用及機制研究.pdf

1、目的:
　　觀察基于補腎益精法中藥復方的黃芪甲苷對系統(tǒng)性硬皮病成纖維細胞的影響，并通過測量成纖維細胞Collagen I，F(xiàn)ibronectin、Smad3、Flil及其mRNA的變化來進一步闡明硬皮病的發(fā)病機理，探索硬皮病治療新的干預靶點，為現(xiàn)代硬皮病治療提供新的思路和途徑。
　　方法:
　　體外層面，分離、培養(yǎng)來自系統(tǒng)性硬皮病患者皮損和健康人對應部位的皮膚原代成纖維細胞，用補腎益精法復方含藥血清、黃芪甲苷、PBS溶

2、液分別處理兩組細胞，采用Western Blot技術檢測各組細胞Collagen I，F(xiàn)ibronectin，Smad3與Fli1蛋白表達水平，RT-PCR檢測Collagen I，F(xiàn)ibroneetin，Smad3與Fli1的mRNA表達，免疫熒光技術檢測Smad3的活性與定位的調節(jié)。體內層面，用博萊霉素誘導的硬皮病小鼠模型采用同樣方法進行體內實驗，并進行病理組織切片、染色，觀察小鼠皮膚病理變化，評價效果。
　　結果:
　

3、　1.成功建立硬皮病小鼠模型:與正常對照組相比，硬皮病模型組中CollagenI、Fibronectin的mRNA均增加(p＜0.05);與硬皮病模型組相比，補腎益精法中藥復方、黃芪甲苷干預的硬皮病小鼠的CollagenI、Fibronectin的mRNA均降低(p＜0.05)。
　　2.成功構建硬皮病成纖維細胞系:和NF相比，SScF中CollagenI、Fibronectin的mRNA均增加(p＜0.05);和SScF相比，不

4、同濃度干預的SScF的CollagenI、Fibronectin的mRNA均降低(p＜0.05)。
　　3.和NF相比，SScF中Fli1的mRNA的表達明顯降低(p＜0.05);和SScF相比，經(jīng)不同濃度的黃芪甲苷干預的SScF的Fli1的mRNA上調(p＜0.05)。
　　4.與NF相比，Smad3在硬皮病成纖維細胞中經(jīng)補腎益精法中藥復方及黃芪甲苷干預前后變化不明顯(p＞0.05);P-Smad3顯著增加，黃芪甲苷干預的