胃癌細胞高活性乙醛脫氫酶亞型分析及其在胃癌組織表達規(guī)律.pdf

1、腫瘤是一個具備明顯異質性的群體，腫瘤干細胞(cancer stem cells，CSCs)作為其中的關鍵亞群在腫瘤發(fā)生、進展、治療抵抗、復發(fā)等方面起到重要作用。其中，乙醛脫氫酶(Aldehyde dehydrogenase，ALDH)活性是近年來新發(fā)現(xiàn)的CSC標志物，ALDH參與調節(jié)細胞增殖、分化等多個重要過程，并逐漸作為干性相關指標判斷腫瘤患者生存預后。ALDH家族包括19種亞型，各亞型表達呈現(xiàn)明顯的腫瘤特異性及組織特異性。在胃癌方面

2、，有報道ALDH+胃癌細胞具備一定的干細胞特性，然而尚沒有關于胃癌中高活性ALDH亞型的研究。因此針對胃癌細胞中高活性ALDH家族亞型的分析對于探究其在CSC發(fā)生中的調節(jié)機制以及選擇預后指標方面具有重要意義。
　　本研究擬對胃癌細胞中高活性乙醛脫氫酶亞型進行分析并在組織層面分析其表達規(guī)律。
　　研究方法:
　　1、ALDH+亞群干細胞特性鑒定。
　　1)采用AldeFluor染色及流式分選方法在MKN-45及SG

3、C-7901胃癌細胞株中對ALDH+以及ALDH-亞群進行分選，并通過通過無血清成球培養(yǎng)法進行擴增。
　　2)實時定量PCR及WesternBlot方法檢測ALDH+亞群細胞干性相關基因Bmi-1、Sox-2、Oct-4表達;
　　3)成球培養(yǎng)法驗證ALDH+細胞自我更新能力;
　　4)采用血清培養(yǎng)法驗證ALDH+細胞是否可發(fā)生分化;
　　5)皮下移植瘤實驗驗證ALDH+細胞是否具備高成瘤能力。
　　2、A

4、LDH+亞群高表達ALDH3A1。
　　1)采用實時定量PCR法分析該亞群中19種ALDH家族成員表達;
　　2)采用si-RNA干擾ALDH3A1表達驗證ALDH+亞群比例是否改變;
　　3、ALDH3A1表達與胃癌組織分化程度相關。
　　收集胃癌組織，采用免疫組化染色分析其高表達成員ALDH3A1在胃癌組織中的表達規(guī)律。
　　研究結果:
　　1、ALDH+亞群高表達干性相關基因，并具備自我更新、多

5、向分化及高成瘤能力。
　　1) MKN-45及SGC-7901胃癌細胞株中含較高比例ALDH+亞群，該亞群可通過無血清成球培養(yǎng)法進行擴增。
　　2)實時定量PCR及WesternBlot方法檢測發(fā)現(xiàn)ALDH+亞群細胞高表達干性相關基因Bmi-1、Sox-2、Oct-4;
　　3) ALDH+細胞可以成球培養(yǎng)并連續(xù)傳代;
　　4) ALDH+細胞置于10％FBS培養(yǎng)基中培養(yǎng)后其干性標志CD44表達下降;
　　

6、5)移植瘤實驗方面，相同數(shù)量級的細胞ALDH+細胞較ALDH-細胞具備更強的成瘤能力。
　　2、ALDH+亞群高表達ALDH3A1。
　　1)實時定量PCR法分析該亞群中19種ALDH家族成員表達，結果顯示ALDH3A1、ALDH2、ALDH16A1以及ALDH18A1等多個成員表達升高，其中ALDH3A1表達升高最明顯。
　　2)進一步采用si-RNA干擾ALDH3A1表達后，ALDH+亞群比例下降。
　　3、