過(guò)表達(dá)Foxn1誘導(dǎo)人胚胎干細(xì)胞定向分化為胸腺上皮細(xì)胞的研究.pdf

1、自第一株人胚胎干細(xì)胞系成功建立以來(lái)，人胚胎干細(xì)胞(humanembryonic stem cells，hESCs)在再生醫(yī)學(xué)領(lǐng)域的應(yīng)用前景受到越來(lái)越多研究者的關(guān)注。hESCs是一種具有向所有細(xì)胞分化的多分化潛能以及在體外無(wú)限擴(kuò)增的自我更新能力的細(xì)胞，這些特性為細(xì)胞治療提供大量供體細(xì)胞帶來(lái)了很大的希望。胸腺是機(jī)體重要的中樞免疫器官，它不僅是哺乳動(dòng)物T細(xì)胞發(fā)育分化和成熟的場(chǎng)所，而且還可以通過(guò)消除自體反應(yīng)T細(xì)胞從而形成自身免疫耐受。胸腺機(jī)能障

2、礙將嚴(yán)重影響機(jī)體免疫功能，使機(jī)體免疫自穩(wěn)功能紊亂并伴發(fā)自身免疫性疾病。胸腺移植對(duì)免疫缺陷患者的治療具有很大的臨床意義，但是器官供體的短缺使得這一治療方法得不到廣泛應(yīng)用。通過(guò)在體外將hESCs分化為胸腺上皮細(xì)胞可以建立一個(gè)胸腺上皮細(xì)胞的發(fā)育模型，并為細(xì)胞治療提供大量可移植的胸腺上皮細(xì)胞。
　　本課題通過(guò)在人胚胎干細(xì)胞中過(guò)表達(dá)轉(zhuǎn)錄因子Foxn1，觀察細(xì)胞形態(tài)變化并檢測(cè)標(biāo)志基因的表達(dá)，成功地將其定向分化為胸腺上皮細(xì)胞。利用TALEN介導(dǎo)

3、的同源重組在人胚胎干細(xì)胞中敲入Foxn1-mCherry報(bào)告元件，使其能夠指示內(nèi)源Foxn1的表達(dá)。通過(guò)Tet-on誘導(dǎo)表達(dá)慢病毒系統(tǒng)在人胚胎干細(xì)胞系X-01中過(guò)表達(dá)Foxn1，發(fā)現(xiàn)人胚胎干細(xì)胞逐漸分化，細(xì)胞形態(tài)變扁平，細(xì)胞體積變大，表現(xiàn)出類似胸腺上皮細(xì)胞的形態(tài)。RT-PCR結(jié)果表明，過(guò)表達(dá)Foxn1后胸腺上皮細(xì)胞的標(biāo)志基因Tbx1、Hoxa3、Eya1、K5、K8和內(nèi)源Foxn1的mRNA水平都顯著上調(diào)，并且隨著誘導(dǎo)時(shí)間的延長(zhǎng)而增加，