microRNA-141在結(jié)直腸癌組織中的表達及其靶基因預測.pdf

1、目的：近年來，結(jié)直腸癌已成為罹患率較高的消化道常見惡性腫瘤之一。我國大腸癌發(fā)病率在過去的30年呈顯著增長，已升至惡性腫瘤死因的第4位，嚴重威脅人民的生命及生活質(zhì)量。我國結(jié)直腸癌的早期篩查工作在我國大城市逐漸開展，但是在我國廣大地區(qū)篩查工作并不普及，許多患者在首診時已是局部進展期或出現(xiàn)遠處轉(zhuǎn)移，手術切除困難或失去手術機會，對于進展期結(jié)直腸癌，術后復發(fā)率高患者預后較差。通過從基因、分子水平研究結(jié)直腸癌的發(fā)病機制，尋找結(jié)直腸癌特異性的分子標志

2、物以期早期診斷結(jié)直腸癌，并在基因、分子水平探討新的治療方式。微小 RNA(MicroRNA, miRNA)一般是由18-25個核苷酸組成的的非編碼小分子RNA。作為單鏈的 RNA分子，其主要作用于靶基因3’非翻譯區(qū)(untranslated region,UTR)，引起靶 mRNA的降解或抑制其翻譯，其功能為調(diào)節(jié)內(nèi)源基因的表達，調(diào)控細胞活動的大多數(shù)環(huán)節(jié)都有其參與。近年來多項研究發(fā)現(xiàn)miRNA在多種癌癥的發(fā)生、發(fā)展及轉(zhuǎn)歸等過程中發(fā)揮重要作

3、用。其中，miRNA-200家族在多種惡性腫瘤中的研究取得了較大的進展。microRNA-141為 miRNA-200家族重要一員，常作為潛在的抑癌基因或癌基因發(fā)揮作用，可能與腫瘤細胞分化、增殖、侵襲、遷移和轉(zhuǎn)移相關。本研究擬通過實時定量PCR方法檢測26例結(jié)直腸癌組織與癌旁腸粘膜組織中microRNA-141的表達水平，探究表達水平與結(jié)直腸癌患者的臨床病理參數(shù)之間的相關性。利用生物信息學方法，篩選出miRNA-141的相關靶基因，對篩

4、選出的靶基因的功能進行GO分析，進一步探究結(jié)直腸癌發(fā)生、發(fā)展機制。
　　方法：
　　1、選取2014年11月至2015年3月期間在河北醫(yī)科大學第四醫(yī)院外二科手術切除的26例結(jié)直腸癌組織及其癌旁正常腸粘膜組織。
　　2、通過利用實時熒光定量 PCR檢測技術檢測癌組織及癌旁正常腸粘膜組織中microRNA-141的表達水平；搜集26例患者術后的病理情況及臨床相關數(shù)據(jù)，包括患者年齡、性別、腫瘤對腸管的外侵情況（T分期）、淋巴

5、結(jié)轉(zhuǎn)移情況（N分期）、TNM分期、病理分化程度、術前癌胚抗原（CEA）水平。
　　3、統(tǒng)計分析：計量資料以(?x±s)表示，通過配對t檢驗的統(tǒng)計學方法檢驗腺癌組織及配對癌旁正常腸粘膜間的microRNA-141表達量差異，通過利用單因素方差分析方法檢測microRNA-141表達量的差異與患者術后病理結(jié)果及臨床數(shù)據(jù)間的相關性，設定P<0.05具有統(tǒng)計學意義,利用SPSS l3.0軟件進行數(shù)據(jù)分析。
　　4、通過生物信息學方法

6、，在miRecords平臺，其中包含11個醫(yī)學信息學軟件篩選miRNA-141的靶基因，選取6個及以上軟件共同預測的靶基因，對靶基因進行GO分析，篩選出具有顯著性、低誤判率的相關功能。
　　結(jié)果：
　　1、首先，我們運用實時熒光定量 PCR技術檢測了結(jié)直腸癌組織和癌旁正常腸粘膜中miR-141的表達水平，與癌旁正常腸粘膜組織相比，結(jié)直腸癌組織中的microRNA-141的表達水平明顯下降。microRNA-141在結(jié)直腸癌組

7、織的△Ct值為11.686?4.296，而在配對正常腸粘膜組織△Ct值為13.321?3.827。且差異具有統(tǒng)計學意義，P<0.05。
　　2、microRNA-141表達量與術后患者標本病理情況及臨床參數(shù)年齡、性別、腫瘤在腸管內(nèi)浸潤深度（T分期）、腫瘤伴淋巴轉(zhuǎn)移情況（N分期）， TNM分期、癌胚抗原（CEA）水平均無顯著的關系。中分化腺癌為18例，低分化腺癌8例，microRNA-141的表達分別為8.015（2.078-13.

8、952）、1.363（0.461-2.265）,P<0.05。陽性結(jié)果提示：microRNA-141的表達情況有望成為結(jié)直腸癌的預后判斷指標之一。
　　3、通過生物學信息法篩選出的靶基因共77個，基于Gene Ontology數(shù)據(jù)庫，對靶基因進行GO分類，并對其進行顯著性篩選，提示部分靶基因參與細胞凋亡信號傳導、囊泡的停靠、膜之間的對接、外胚層的發(fā)育等生物學過程。
　　結(jié)論：
　　1、microRNA-141在結(jié)直腸癌

9、組織中低表達，提示microRNA-141可能在結(jié)直腸癌中發(fā)揮類似抑癌基因的作用。
　　2、microRNA-141表達水平與腫瘤病理分化程度存在相關性，這一點提示我們microRNA-141有望成為結(jié)直腸癌的預后判斷指標之一，為我們判斷結(jié)直腸癌的預后提供了參考。
　　3、經(jīng)過生物信息學預測，miRNA-141能夠靶定相關基因，并通過影響其功能，參與細胞凋亡信號傳導、囊泡的?？?、膜之間的對接、外胚層的發(fā)育等生物學過程，進而引