MEPE蛋白影響前列腺癌細胞遷移作用機制研究.pdf

1、目的：研究細胞外基質磷酸糖蛋白（MEPE）在前列腺癌細胞中的表達水平對前列腺癌細胞遷移能力的影響，以及MEPE蛋白影響細胞遷移能力的機制與小G蛋白家族蛋白PI3K/Rac1/PAK1通路的關系。為闡明腫瘤浸潤及轉移機制提供實驗依據(jù)。
　　方法：構建腺病毒包裝質粒pYr-ads-4-mMEPE與pYr-ads-4-siMEPE，在HEK293細胞中包裝形成腺病毒顆粒，分別轉染正常前列腺上皮細胞株RWPE1與前列腺癌細胞株PC3，同時

2、轉染空質粒作為對照細胞株。免疫印跡檢測轉染細胞株中MEPE蛋白表達水平，確定轉染效果。通過經(jīng)典的劃痕實驗、Transwell侵襲/遷移實驗對比人為上調或下調MEPE蛋白表達水平的細胞株以及其對應的空載體的細胞株之間侵襲/遷移能力的差異。進一步采用免疫印跡方法檢測MEPE蛋白表達水平不同的各個細胞株內信號通路PI3K/Rac1/PAK1的信號蛋白表達水平是否也隨之改變。
　　結果：⑴經(jīng)酶切與測序驗證，pYr-ads-4-mMEPE與

3、pYr-ads-4-siMEPE重組質粒構建成功，免疫印跡分析驗證轉染rAd-4-mMEPE的RWPE1細胞株中MEPE蛋白表達水平上調，轉染rAd-4-siMEPE的PC3細胞株中MEPE蛋白表達水平下調，而轉染相應空載體的細胞株中MEPE蛋白的表達水平與野生型細胞株一致，說明腺病毒質粒構建成功可在真核細胞表達。⑵通過劃痕實驗分別在0h與48h觀察轉染rAd-4-mMEPE的RWPE1細胞株、轉染rAd-4-siMEPE的PC3細胞株

4、以及其對照細胞株細胞遷移情況，MEPE蛋白表達水平高的細胞株遷移率分別為83％、56%，空載體對照細胞遷移率為68%、79%，實驗結果表明MEPE蛋白表達水平高的細胞株細胞遷移能力明顯增強。⑶Transwell實驗觀察到轉染rAd-4-mMEPE的RWPE1細胞株遷移率比對照細胞株增加了15%，轉染rAd-4-siMEPE的PC3細胞株遷移率比對照細胞株下降了23%。實驗結果表明MEPE蛋白表達水平高的細胞株細胞遷移能力明顯增強。⑷免疫

5、印跡分析結果顯示，轉染rAd-4-mMEPE的RWPE1細胞株、轉染rAd-4-siMEPE的PC3細胞株以及其對照細胞株中PI3K與Rac1的信號蛋白表達水平也隨MEPE表達水平改變而改變。在RWPE1細胞中其中隨著MEPE蛋白表達水平增高，PI3K與Rac1表達水平也升高，在MEPE蛋白表達水平較低的轉染rAd-4-siMEPE的PC3細胞株與轉染空載體的RWPE1細胞株中，PI3K與Rac1表達水平較低，actin的表達水平未見明