阿托伐他汀對(duì)靜脈橋的保護(hù)作用及機(jī)制初探.pdf

1、目的:冠狀動(dòng)脈旁路移植術(shù)(coronary artery bypass graft，CABG)作為一種穩(wěn)定而有效的血管重建方法[1]被廣泛地應(yīng)用于治療冠狀動(dòng)脈粥樣硬化性心臟病，但其遠(yuǎn)期療效不甚理想。血管內(nèi)膜增生是導(dǎo)致血管重建術(shù)后自體靜脈橋管腔狹窄或閉塞的主要原因，已被大量的研究所證實(shí)。引起靜脈移植再狹窄的主要原因是血管內(nèi)皮損傷，其主要是由于血管內(nèi)膜增生，血管平滑肌細(xì)胞(vascular smooth muscle，VSMCs)過度增殖及

2、分泌大量細(xì)胞外基質(zhì)。即再狹窄是一種由于手術(shù)的物理性損傷導(dǎo)致的缺血再灌注損傷后的局部血管修復(fù)反應(yīng)，是血管重塑的過程。因此，阻斷血管平滑肌的過度增殖是預(yù)防CABG術(shù)后靜脈橋再狹窄的有效策略。
　　大量的研究證實(shí)，阿托伐他汀能夠抑制血管平滑肌的增殖，據(jù)此推測(cè)，阿托伐汀可能阻斷CABG術(shù)后發(fā)生靜脈橋再狹窄，但其發(fā)生機(jī)制至今尚未闡明。NF-κB是從B淋巴細(xì)胞核中檢測(cè)到的一種能與免疫球蛋κ輕鏈基因的增強(qiáng)子κB序列特異結(jié)合的核蛋白因子。非活化狀

3、態(tài)下NF-κB以與IκB聚合的三聚體形式或與前體蛋白聚合的二聚體形式存在于胞漿中，在多種細(xì)胞因子的作用下，通過多種信號(hào)途徑IκB發(fā)生磷酸化并與NF-κB解聚，NF-κB被激活，將信息由胞漿傳遞至胞核并啟動(dòng)相關(guān)靶基因的轉(zhuǎn)錄，參與自由基損傷、細(xì)胞凋亡、免疫調(diào)節(jié)、炎癥反應(yīng)等病理生理過程[2]。此外，還有一些研究發(fā)現(xiàn)，當(dāng)血管內(nèi)皮細(xì)胞損傷發(fā)生時(shí)，多種炎癥介質(zhì)和細(xì)胞因子釋放，激活NF-κB，NF-κB二聚體被活化，NF-κB激活后上調(diào)平滑肌細(xì)胞及內(nèi)

4、皮細(xì)胞等基因表達(dá)，引起血管內(nèi)膜增生而誘導(dǎo)管腔狹窄。但CABG術(shù)后靜脈橋血管內(nèi)皮細(xì)胞增殖是否通過NF-κB信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)途徑誘導(dǎo)再狹窄，尚有待闡明。為此，本實(shí)驗(yàn)旨在觀察CABG術(shù)后靜脈橋血管內(nèi)皮細(xì)胞增殖是否通過NF-κB信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)通路誘導(dǎo)再狹窄，探討阿托伐他汀是否通過NF-κB信號(hào)通路發(fā)揮對(duì)靜脈橋的保護(hù)作用。
　　方法:健康雄性新西蘭大白兔(3±0.5Kg)40只，建立自體靜脈移植動(dòng)物模型。
　　1、阿托伐他汀鈣對(duì)靜脈橋血管壁內(nèi)膜厚度

5、、平滑肌細(xì)胞數(shù)及超微結(jié)構(gòu)的影響。
　　具體分組如下:①假手術(shù)組(sham)組(n=10):僅分離左側(cè)頸外靜脈，不行血管移植，假手術(shù)1d起，經(jīng)胃管灌注生理鹽水;②移植對(duì)照組（control）組(n=10):靜脈移植術(shù)后1d起，經(jīng)胃管灌注生理鹽水;③阿托伐他汀鈣(atorvastatin)5mg組(n=10):靜脈移植術(shù)后1d起，經(jīng)胃管灌注阿托伐他汀，劑量為5mg/kg.d;④阿托伐他汀鈣(atorvastatin)10mg組(n=1

6、0):靜脈移植術(shù)后1d起，經(jīng)胃管灌注阿托伐他汀，劑量為10mg/kg.d。
　　每組共處理4w，在靜脈移植后或假手術(shù)后4w取靜脈橋，分別用HE染色法、免疫組化、電鏡觀察阿托伐他汀對(duì)靜脈橋血管壁內(nèi)膜厚度、平滑肌細(xì)胞數(shù)及超微結(jié)構(gòu)的影響。
　　2、阿托伐他汀鈣對(duì)NF-κB蛋白及NF-κB p50/p65二聚體復(fù)合物表達(dá)的影響。
　　具體分組如下:①假手術(shù)組(sham)組(n=10):僅分離左側(cè)頸外靜脈，不行血管移植，假手術(shù)1

7、d起，經(jīng)胃管灌注生理鹽水;②移植對(duì)照組（control）組(n=10):靜脈移植術(shù)后1d起，經(jīng)胃管灌注生理鹽水;③阿托伐他汀鈣(atorvastatin)5mg組(n=10):靜脈移植術(shù)后1d起，經(jīng)胃管灌注阿托伐他汀，劑量為5mg/kg.d;④阿托伐他汀鈣(atorvastatin)10mg組(n=10):靜脈移植術(shù)后1d起，經(jīng)胃管灌注阿托伐他汀，劑量為10mg/kg.d。
　　每組共處理4w，在靜脈移植術(shù)后或假手術(shù)后4w取靜脈橋

8、，應(yīng)用Western blot方法觀察NF-κB蛋白表達(dá)的變化，免疫共沉淀（Co-immunoprecipitation）方法觀察NF-κB p50/p65二聚體復(fù)合物表達(dá)的變化。探討阿托伐他汀對(duì)NF-κB表達(dá)的影響。
　　結(jié)果:
　　1、阿托伐他汀鈣對(duì)靜脈橋血管壁內(nèi)膜厚度的影響
　　采用HE染色方法，在光鏡下觀察靜脈橋移植術(shù)后，靜脈橋血管壁內(nèi)膜厚度的變化。
　　Control組(Fig.2)、atoravast

9、atin5mg組(Fig.3)、atoravastatin10mg組(Fig.4)靜脈橋血管管壁與sham組(Fig.1)相比，均有不同程度的增厚(P＜0.05)。與Sham組(Fig.1)相比，Control組(Fig.2)靜脈橋血管壁明顯增厚(P＜0.01)。與Control組(Fig.2)相比，atoravastatin5 mg組(Fig.3)無顯著性差異(P＞0.05);atoravastatin10mg組(Fig.4)靜脈橋血

10、管管壁平滑，內(nèi)膜增生程度明顯減少(P＜0.05)。
　　2、阿托伐他汀鈣對(duì)靜脈橋血管壁內(nèi)膜平滑肌數(shù)目的影響
　　采用免疫組化方法，在光鏡下觀察靜脈橋移植術(shù)后，靜脈橋血管壁內(nèi)膜平滑肌細(xì)胞數(shù)目的變化。
　　Control組(Fig.6)、atoravastatin5 mg組(Fig.7)、atoravastatin10 mg組(Fig.8)靜脈橋血管內(nèi)皮及平滑肌層與sham組(Fig.5)相比，均有不同程度的增殖(P＜0.

11、05)。與Sham組(Fig.5)相比，Control組(Fig.6)有大量增殖細(xì)胞深染(P＜0.01);atoravastatin5 mg組(Fig.7)深染的增殖細(xì)胞雖較Control組有所減少，但無明顯變化(P＞0.05);atoravastatin10 mg組(Fig.8)深染的增殖細(xì)胞明顯減少(P＜0.05)。
　　3、阿托伐他汀鈣對(duì)靜脈橋血管壁超微結(jié)構(gòu)的影響
　　在電鏡下觀察靜脈橋移植術(shù)后，靜脈橋血管壁超微結(jié)構(gòu)的

12、變化。
　　Control組(Fig.9)可見靜脈橋血管壁內(nèi)膜明顯增厚。與Control組(Fig.9)相比，atoravastatin5 mg組(Fig.10)，靜脈橋血管壁內(nèi)膜有一定程度的增厚，雖較Control組(Fig.9)少，但無顯著差異（P＞0.05）;atoravastatin10 mg組(Fig.11)內(nèi)膜連續(xù)性好(P＜0.05)。
　　4、阿托伐他汀鈣對(duì)NF-κB蛋白表達(dá)的影響
　　應(yīng)用Western

13、 blot方法觀察靜脈橋移植術(shù)后，阿托伐他汀鈣對(duì)NF-κB蛋白表達(dá)的影響
　　NF-κB p50（Fig.12）在Sham組、control組、atoravastatin5 mg組、atoravastatin10 mg均有一定的表達(dá)量。Sham表達(dá)量較少。與Sham組相比，control組、atoravastatin5 mg組、atoravastatin10 mg組其蛋白表達(dá)均有所上調(diào)(P＜0.05)。與control組相比，at

14、oravastatin5 mg組其蛋白表達(dá)雖有所下調(diào)，但無顯著性差異(P＞0.05)，atoravastatin10 mg組此蛋白表達(dá)明顯下調(diào)(P＜0.05)。
　　上述結(jié)果表明，阿托伐他汀鈣能夠顯著下調(diào)NF-κB p50的表達(dá)。
　　5、阿托伐他汀鈣對(duì)NF-κB p50/p65二聚體復(fù)合物表達(dá)的影響
　　通過免疫共沉淀(Co-immunoprecipitation)的方法研究了靜脈橋移植術(shù)后，阿托伐他汀鈣對(duì)NF-κB

15、 p50/p65二聚體復(fù)合物表達(dá)的影響。
　　NF-κB p50/p65二聚體復(fù)合物(Fig.12)在Sham組、control組、atoravastatin5 mg組、atoravastatin10 mg組均有表達(dá)，其中control組此二聚體復(fù)合物表達(dá)最多。與Sham組相比，control組其表達(dá)顯著上調(diào)(P＜0.01);atoravastatin5 mg組此二聚體復(fù)合物表達(dá)雖有所下調(diào)，但明顯高于Sham組(P＜0.05)。與

16、control組相比，atoravastatin10 mg組其表達(dá)明顯下調(diào)，差異有顯著性(P＜0.01)。
　　上述結(jié)果表明，阿托伐他汀鈣能夠有效阻斷靜脈橋移植術(shù)后NF-κBp50/p65二聚體復(fù)合物數(shù)量的上調(diào)。
　　小結(jié):
　　1、靜脈橋移植術(shù)后，NF-κB的蛋白表達(dá)顯著上調(diào);NF-κB被激活，即表現(xiàn)為NF-κB發(fā)生二聚體化，NF-κB二聚體復(fù)合物明顯上調(diào)，并由胞漿轉(zhuǎn)移至胞核。
　　2、靜脈橋移植術(shù)后，經(jīng)10