人嬰兒期心肌細胞的增殖特征及機制的研究.pdf

1、研究背景和目的：0-12月的嬰兒期是出生后心臟發(fā)育的關鍵時期。這段時期內，嬰兒心臟的結構和功能發(fā)生了快速的變化，外在表現(xiàn)為心率從150次/分鐘減慢為80次/分鐘，而收縮壓則從55mmHg上升到100mmHg。死于先天性心臟病的患兒55.3%是發(fā)生在這段時期并且絕大部分復雜先天性心臟病（如大動脈錯位、肺動脈閉鎖等）需要在新生兒或嬰兒早期手術。心肌細胞增殖關系到心臟的發(fā)育和手術后心臟的修復，是目前研究的熱點之一。然而，由于人體心肌組織標本的

2、獲取困難，目前對于人心肌細胞的增殖的研究僅有數(shù)篇報道，特別是對于嬰兒早期心肌細胞的增殖所知更少。本研究擬收集一歲內的人心肌組織，觀察人嬰兒早期心肌細胞增殖的特征；并探討調控嬰兒心肌細胞增殖改變的內在機理；在上述研究的基礎上，利用小分子化合物探索藥物促進嬰兒早期心肌細胞增殖的可能；最后研究心肌細胞增殖在先天性心臟病外科手術中的意義。
　　方法：采用蘇木精-伊紅染色比較0-12月心肌細胞的形態(tài)學特征，利用激光共聚焦顯微鏡和流式細胞術觀

3、察Ki67陽性和Aurora B陽性心肌細胞的比例，明確嬰兒早期心肌細胞的增殖特征。利用Western Blot、Qrt-pcr、免疫熒光和免疫組化等方法觀察目前已知的關鍵性調控因子在人心肌細胞的表達情況；分離人心肌細胞在體外進行培養(yǎng)，觀察添加小分子化合物后，EdU陽性和Ki67陽性心肌細胞比例的改變；對小鼠行肺動脈環(huán)縮術，超聲確定環(huán)縮效果，免疫熒光檢測右心室增殖的心肌細胞，Qrt-PCR檢測增殖肥大相關基因的改變。
　　結果：H

4、E染色顯示心肌細胞的平均體積隨年齡的增加而不斷加大。激光共聚焦顯微鏡顯示0-3月，4-6月和7-12月的Ki67陽性心肌細胞的比例分別為0.55±0.02%、0.05±0.01%和0.02±0.005%，而Aurora B陽性心肌細胞的比例分別為0.12±0.02%、0.01±0.01%和0.005±0.004%；流式細胞術顯示0-3月，4-6月和7-12月的Ki67陽性心肌細胞的比例分別為0.47±0.16、0.07±0.02和0.0

5、2±0.01。Western-blot，免疫熒光和免疫組化顯示關鍵性轉錄因子 NICD和 YAP1表達隨著年齡的推移而減少，而β-catenin的表達隨年齡的增加而增加。嬰兒早期心肌細胞在體外培養(yǎng)較易培養(yǎng)，小分子化合物CHIR99021可以明顯促進嬰兒早期心肌細胞的增殖。小鼠肺動脈環(huán)縮術后，增殖的心肌細胞明顯增加并且與增殖有關的基因也明顯上調。
　　結論：0-3月的人心肌細胞具有十分突出的增殖能力，是嬰兒早期心肌細胞的特征之一；N