姜黃素促進(jìn)HepG2細(xì)胞攝取LDL-C的機(jī)制研究.pdf

1、目的：研究姜黃素（Curcumin）對HepG2細(xì)胞攝取LDL-C的影響及相關(guān)分子機(jī)制，闡明姜黃素改善血脂、減緩動脈粥樣硬化進(jìn)程的作用，為姜黃素作為降脂藥物的臨床開發(fā)提供科學(xué)依據(jù)。
　　方法：HepG2細(xì)胞接種于含有1％青-鏈霉素混合液+10%FBS的DMEM培養(yǎng)基中培養(yǎng)24小時，25mg/L LDL與藥物共孵育24小時。油紅O染色觀察HepG2細(xì)胞內(nèi)脂質(zhì)蓄積情況。酶學(xué)方法測定細(xì)胞內(nèi)游離膽固醇和總膽固醇的水平。DiI標(biāo)記LDL檢測

2、細(xì)胞攝取LDL-C的含量變化。免疫熒光流式檢測細(xì)胞膜LDLR分布豐度。RT-Q-PCR測定相關(guān)基因LDLR，SREBP2及HMGCR的mRNA表達(dá)。Western blot檢測LDLR、SREBP2、HMGCR、PCSK9及IDOL蛋白的表達(dá)。
　　結(jié)果：
　　1.油紅O染色顯示，與Basal組相比，Control組細(xì)胞內(nèi)紅色脂滴顆粒比Basal組稍有增加；與Control組相比，Vehicle組細(xì)胞內(nèi)脂滴變化無差異，Cur

3、cumin組細(xì)胞油紅O陽性率及紅色脂滴數(shù)明顯增加。
　　2.膽固醇含量測定結(jié)果顯示，與Basal組相比，Control組細(xì)胞內(nèi)總膽固醇（TC）和游離膽固醇（FC）水平增高，提示本研究造模成功；與Control組相比，Vehicle組細(xì)胞內(nèi)TC和FC水平增高但無統(tǒng)計學(xué)差異（P>0.05），Curcumin組細(xì)胞內(nèi)TC和FC水平顯著性增高（P<0.01）。結(jié)果表明溶媒對細(xì)胞內(nèi)TC和FC水平無影響，姜黃素促進(jìn)HepG2細(xì)胞內(nèi)TC和FC含

4、量的增加。
　　3.DiI-LDL攝取實驗結(jié)果顯示，與Control組比較，LPDS組HepG2細(xì)胞熒光強(qiáng)度明顯增強(qiáng)，而25-HC組熒光強(qiáng)度則明顯減弱；Curcumin組HepG2細(xì)胞熒光強(qiáng)度高于Control組，表明姜黃素促進(jìn)HepG2細(xì)胞攝取LDL。
　　4.免疫熒光流式結(jié)果顯示，與Control組比較，Curcumin組HepG2細(xì)胞的細(xì)胞膜表面LDLR分布豐度增高。
　　5.RT-Q-PCR及western b

5、lot結(jié)果顯示，姜黃素顯著性升高了HepG2細(xì)胞LDLR，SREBP2及HMGCR的mRNA及蛋白含量。同時，姜黃素顯著性下調(diào)PCSK9及IDOL蛋白的表達(dá)水平。
　　綜合以上結(jié)果，一方面姜黃素上調(diào)HepG2細(xì)胞SREBP2及其下游靶基因LDLR的表達(dá)；另一方面姜黃素可以下調(diào)HepG2細(xì)胞PCSK9和IDOL的蛋白表達(dá)，進(jìn)而減少了LDLR的降解。兩方面協(xié)同作用，上調(diào)HepG2細(xì)胞LDLR蛋白含量，促進(jìn)細(xì)胞攝取LDL，使細(xì)胞內(nèi)脂滴增