MALDI-TOF MS在血培養(yǎng)陽性標(biāo)本微生物直接檢驗(yàn)及碳青霉烯類耐藥性快速檢測(cè)中的應(yīng)用研究.pdf

1、目的：利用基質(zhì)輔助激光解析電離飛行時(shí)間質(zhì)譜（MALDI-TOF MS）直接鑒定血培養(yǎng)陽性標(biāo)本中微生物，并在此鑒定結(jié)果基礎(chǔ)上對(duì)血培養(yǎng)中常見細(xì)菌直接進(jìn)行藥敏試驗(yàn)，為臨床快速合理有效的抗血流感染治療提供依據(jù)。利用MALDI-TOF MS快速檢測(cè)耐碳青霉烯類腸桿菌科細(xì)菌（CRE）的厄他培南水解能力，為腸桿菌科細(xì)菌耐藥性的快速檢測(cè)提供新途徑。
　　方法：⑴對(duì)491例血培養(yǎng)陽性標(biāo)本中微生物采用MALDI Sepsityper Kit試劑盒聯(lián)合

2、MALDI-TOF MS（簡(jiǎn)稱MSK-質(zhì)譜法）、分離膠聯(lián)合MALDI-TOF MS（簡(jiǎn)稱分離膠-質(zhì)譜法）進(jìn)行直接鑒定，并同時(shí)對(duì)血培養(yǎng)陽性標(biāo)本進(jìn)行常規(guī)分離培養(yǎng)及鑒定（簡(jiǎn)稱常規(guī)鑒定），結(jié)果不符的用基因測(cè)序予以確認(rèn)；⑵基于分離膠-質(zhì)譜法的鑒定結(jié)果，對(duì)236株血培養(yǎng)常見細(xì)菌同時(shí)進(jìn)行K-B法直接藥敏試驗(yàn)和K-B法常規(guī)藥敏試驗(yàn)以及 MIC法直接藥敏試驗(yàn)和MIC法常規(guī)藥敏試驗(yàn)，分別比對(duì)直接藥敏試驗(yàn)和常規(guī)藥敏試驗(yàn)的結(jié)果；⑶利用MALDI-TOF MS對(duì)

3、108株CRE與9株碳青霉烯類敏感的腸桿菌科細(xì)菌進(jìn)行厄他培南水解試驗(yàn)。
　　結(jié)果：①與常規(guī)鑒定（或基因測(cè)序）結(jié)果比較，MSK-質(zhì)譜法直接鑒定結(jié)果顯示，462例單株菌感染血培養(yǎng)的“種”水平符合率、“屬”水平符合率、未鑒定率和鑒定錯(cuò)誤率分別為72.5％、76.0%、23.6%和0.4%，其中常見細(xì)菌的“種”水平符合率為71.0%~92.9%；29例復(fù)數(shù)菌感染血培養(yǎng)中，有7例兩種細(xì)菌均得以鑒定，15例鑒定出其中一種細(xì)菌，7例兩種細(xì)菌均未

4、鑒定出；MSK-質(zhì)譜法鑒定時(shí)間約為40min/樣本。與常規(guī)鑒定（或基因測(cè)序）結(jié)果比較，分離膠-質(zhì)譜法直接鑒定結(jié)果顯示，462例單株菌感染血培養(yǎng)的“種”水平符合率、“屬”水平符合率、未鑒定率和鑒定錯(cuò)誤率分別為73.6%、77.3%、22.5%和0.2%，其中常見細(xì)菌的“種”水平符合率為78.6%~96.9%；29例復(fù)數(shù)菌感染血培養(yǎng)中，有4例兩種細(xì)菌均得以鑒定，18例鑒定出其中一種細(xì)菌，6例兩種細(xì)菌均未鑒定出，1例鑒定錯(cuò)誤；分離膠-質(zhì)譜法鑒

5、定時(shí)間約為15 min/樣本。②與K-B法常規(guī)藥敏試驗(yàn)結(jié)果相比，革蘭陰性桿菌K-B法直接藥敏試驗(yàn)結(jié)果的符合率、小誤差率和大誤差率分別為97.8%、1.4%和0.8%，革蘭陽性球菌分別為98.5%、0.9%和0.6%；與MIC法常規(guī)藥敏試驗(yàn)結(jié)果相比，革蘭陰性桿菌MIC法直接藥敏試驗(yàn)結(jié)果的符合率、小誤差率和大誤差率分別為98.0%、1.1%和0.9%，革蘭陽性球菌分別為98.4%、0.9%和0.7%。以血培養(yǎng)陽性報(bào)警為起始時(shí)間，至獲得直接藥

6、敏試驗(yàn)結(jié)果大約需要24 h。③102株產(chǎn)碳青霉烯酶CRE的MALDI-TOF MS厄他培南水解試驗(yàn)結(jié)果均為陽性，6株不產(chǎn)碳青霉烯酶CRE與9株碳青霉烯類敏感的腸桿菌科細(xì)菌的MALDI-TOF MS厄他培南水解試驗(yàn)結(jié)果均為陰性，水解試驗(yàn)大約需要2h。
　　結(jié)論：利用MALDI-TOF MS不僅可直接檢驗(yàn)血培養(yǎng)陽性標(biāo)本中微生物，也可快速檢測(cè)腸桿菌科細(xì)菌對(duì)碳青霉烯類耐藥性，具有快速、準(zhǔn)確、經(jīng)濟(jì)、有效等優(yōu)勢(shì)，值得在臨床微生物實(shí)驗(yàn)室推廣應(yīng)用