雙氫青蒿素聯(lián)合放療對人喉鱗癌細(xì)胞的影響.pdf

1、目的：觀察雙氫青蒿素（DHA）對人類喉部鱗狀細(xì)胞癌Hep-2細(xì)胞增殖狀況、放射治療敏感性及聯(lián)合放療時細(xì)胞周期的影響，探討Stat3信號傳導(dǎo)通路在DHA增加細(xì)胞放療敏感性中發(fā)揮的作用及可能機(jī)制。
　　方法：
　　1、細(xì)胞毒性試驗：MTT實驗檢測不同濃度(10μM，20μM，40μM，80μM，160μM，320μM）的DHA分別在24小時和48小時對Hep-2細(xì)胞的生長抑制作用。
　　2、放療增敏試驗：克隆形成實驗分析不

2、同電子線放射劑量（0Gy，2Gy，4Gy，6Gy）時20μMDHA對Hep-2細(xì)胞的放療增敏作用。使用單擊多靶擬合模型方程計算放射增敏比，評價放療增敏的效果。
　　3、細(xì)胞周期檢測：流式細(xì)胞術(shù)檢測分析空白對照組、單獨(dú)20μMDHA治療組、單獨(dú)6Gy電子線放射治療組、20μMDHA聯(lián)合6Gy電子線放射治療組對Hep-2細(xì)胞細(xì)胞周期的影響。
　　4、Westernblot檢測：Westernblot實驗分析空白對照組、單獨(dú)20μ

3、MDHA治療組、單獨(dú)6Gy電子線放射治療組、20μMDHA聯(lián)合6Gy電子線放射治療組處理Hep-2細(xì)胞時，細(xì)胞內(nèi)Stat3、p-Stat3、Cyclin-D1的表達(dá)情況。
　　5、統(tǒng)計學(xué)方法：每個實驗均重復(fù)3次，實驗所得數(shù)據(jù)均經(jīng)Excel整理，SPSS17.0統(tǒng)計軟件分析，統(tǒng)計方法為單因素方差分析，P<0.05為差異有統(tǒng)計學(xué)意義。
　　結(jié)果：
　　1、細(xì)胞毒性試驗：使用10μM，20μM，40μM，80μM，160μM

4、，320μM的DHA處理Hep-2細(xì)胞24小時所對應(yīng)的增殖抑制率分別為0.171±0.016，0.215±0.019，0.308±0.033，0.523±0.061，0.832±0.028，0.904±0.011，處理48小時時所對應(yīng)的增殖抑制率分別為0.197±0.010，0.272±0.029，0.382±0.034，0.742±0.030，0.870±0.013，0.934±0.005；不同濃度之間及同一濃度不同時間之間的差異具有

5、統(tǒng)計學(xué)意義（均P＜0.05），24小時和48小時對應(yīng)的IC50分別為58.48μM、41.98μM。
　　2、放療增敏試驗：20μM的DHA能夠增加Hep-2細(xì)胞對放射治療的敏感性，放療增敏比SER為2.091±0.232。單純經(jīng)2Gy、4Gy、6Gy電子線處理后細(xì)胞存活分?jǐn)?shù)SF分別為0.474±0.023、0.109±0.012、0.026±0.009；經(jīng)20μM的DHA處理后再給予2Gy、4Gy、6Gy電子線照射，所對應(yīng)的SF

6、分別為0.243±0.020、0.035±0.002、0.006±0.002；DHA聯(lián)合放療組比單純放療組相比SF均減少（均P＜0.05）。單純放療時平均致死量D0、準(zhǔn)閾劑量Dq、37％致死量D37分別為1.243±0.073、1.283±0.082、2.525±0.024；放療前使用DHA處理Hep-2細(xì)胞時D0、Dq、D37分別為1.013±0.050、0.638±0.115、1.651±0.065，相比單純放療組均減少(均P＜0.

7、05）。
　　3、細(xì)胞周期檢測：單純給予20μM的DHA處理Hep-2細(xì)胞，G0/G1期阻滯增加(P＜0.05)，S期無顯著變化(P＞0.05)，G2/M期阻滯減少(P＜0.05)；放療前經(jīng)20μM的DHA處理，相比單純放療組，G0/G1期阻滯增加(P＜0.05)，S期明顯增多(P＜0.05)，G2/M期明顯減少(P＜0.05)。
　　4、Westernblot檢測：檢測細(xì)胞內(nèi)Stat3、p-Stat3、Cyclin-D1的

8、蛋白表達(dá)情況，無論是否聯(lián)合放療，20μM的DHA處理Hep-2細(xì)胞較無藥物處理組，Stat3表達(dá)量無明顯變化(P＞0.05)，而p-Stat3（Tyr705）、Cyclin-D1的表達(dá)均減少(均P＜0.05)。然而結(jié)果還提示，無論是否之前經(jīng)DHA處理，Hep-2細(xì)胞在經(jīng)過6Gy的電子線放射治療處理后，細(xì)胞中p-Stat3表達(dá)較無放療組明顯增加(P＜0.05)。
　　結(jié)論：
　　1、DHA能夠抑制Hep-2細(xì)胞的生長；DHA對

9、Hep-2細(xì)胞的增殖抑制作用具有濃度和時間依賴性，隨著DHA藥物濃度的增加以及作用時間的延長，對Hep-2細(xì)胞的增殖抑制作用越強(qiáng)。
　　2、克隆形成實驗證實DHA能夠增加Hep-2細(xì)胞對電子線放射治療的敏感性；
　　3、單獨(dú)應(yīng)用DHA可以引起Hep-2細(xì)胞發(fā)生G0/G1期阻滯，單獨(dú)應(yīng)用放射治療可以導(dǎo)致明顯的G2/M阻滯，在放療前應(yīng)用DHA不僅增加G0/G1期阻滯，還抑制了放療導(dǎo)致的G2/M期阻滯。
　　4、DHA可以通