擬南芥赤霉素受體基因克隆和轉(zhuǎn)化研究.pdf

1、目前已發(fā)現(xiàn)的調(diào)控植物開(kāi)花過(guò)程的分子遺傳學(xué)途徑主要有四個(gè)：春化途徑、光周期途徑、自主開(kāi)花途徑與赤霉素途徑。赤霉素信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)途徑控制著一系列的生長(zhǎng)發(fā)育過(guò)程，調(diào)控開(kāi)花時(shí)間是其重要功能之一。目前已有相關(guān)報(bào)道表明各個(gè)信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)途徑間可能存在復(fù)雜的對(duì)話機(jī)制，進(jìn)而影響植物的發(fā)育與開(kāi)花時(shí)間。為了進(jìn)一步研究赤霉素信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)與其它開(kāi)花途徑之間的相互作用及對(duì)開(kāi)花時(shí)間的影響，我們克隆了赤霉素三個(gè)受體基因，并構(gòu)建了與HA融合的超表達(dá)載體。本研究得到的轉(zhuǎn)基因材料為進(jìn)一步

2、研究擬南芥中赤霉素信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)途徑與其它信號(hào)途徑間的對(duì)話機(jī)制提供了基礎(chǔ)。 本實(shí)驗(yàn)從植株中提取總RNA，經(jīng)逆轉(zhuǎn)錄合成cDNA第一條鏈，再以cDNA第一條鏈為模板，通過(guò)PCR技術(shù)擴(kuò)增目的基因。同時(shí)我們利用Gateway克隆系統(tǒng)，將目的基因?qū)肴腴T載體，經(jīng)過(guò)測(cè)序鑒定得到正確的目的基因片段，再通過(guò)特異性重組將目的基因克隆到表達(dá)載體PK2GW7—HA中。通過(guò)農(nóng)桿菌(Agrobacteriumtumefacieus)轉(zhuǎn)化哥倫比亞野生型擬南芥植株