TLR4及相關炎癥因子在糖尿病大鼠心臟、肝臟和腎臟中的表達.pdf

1、目的:糖尿病(diabete mellitus，DM)是一種常見病，其常見的并發(fā)癥主要發(fā)生在微血管和大血管，如糖尿病腎病、視網(wǎng)膜病、冠心病等。是糖尿病致傷、致殘的主要原因。目前對并發(fā)癥發(fā)病機制的研究較多，但近些年慢性炎癥反應在并發(fā)癥中的作用受關注。其中TLR4(Tolllike receptor4，TLR4)這一普遍存在于多種免疫細胞的模式識別受體介導的炎癥激活可能與DM并發(fā)癥中的炎癥反應有關。已知TLR4表達于巨噬細胞等固有性免疫細胞

2、表面，糖尿病發(fā)生時，其內(nèi)源性配體如熱休克蛋白60(HSP60)、高遷移率族蛋白1(HMGBI)增加，可激活TLR4，誘導炎癥反應。且我們前期臨床和實驗研究中均證實高糖狀態(tài)下多種細胞TLR4的表達顯著升高，與其相關的炎癥因子IL-1β和TNF-α等的表達也升高，但是TLR4在其它臟器的表達及其相關炎癥因子的作用尚未完全清楚。因此，本課題擬制備DM大鼠模型，測定不同組織如肝臟、心臟和腎臟的TLR4及其相關炎癥因子IL-1β和TNF-α的表達

3、，以及大鼠各組織炎癥浸潤的狀態(tài)，全面了解DM狀態(tài)下多臟器的炎癥反應狀態(tài)，進一步探討DM的并發(fā)癥的發(fā)生機制，為DM并發(fā)癥的抗炎治療提供實驗依據(jù)。
　　方法:
　　1、制備糖尿病大鼠模型:SD雄性大鼠腹腔注射STZ(鏈脲佐菌素)，72h后取尾靜脈血測定血糖，兩次檢測濃度均大于16.7mmol/L時為造模成功。糖尿病實驗組大鼠和正常對照組大鼠各10只。
　　2、實驗方法
　　2.1檢測各器官TLR4及其相關炎癥因子mR

4、NA的表達:造模12周后取大鼠的腎臟、心臟、肝臟組織，Real-time PCR方法檢測TLR-4、TNF-α和IL-1β表達水平。
　　2.2檢測各組織器官炎癥浸潤狀態(tài):制備腎臟、心臟、肝臟的組織切片，HE染色檢測炎癥各組織的炎癥細胞。
　　3、統(tǒng)計學方法:采用Excel和SPSS13.0統(tǒng)計學軟件進行數(shù)據(jù)處理分析，數(shù)據(jù)以平均值±標準差表示，均數(shù)用獨立樣本t檢驗來比較組間差異性，P＜0.05為有統(tǒng)計學意義。
　　結果

5、:
　　1、成功建立了Ⅱ型糖尿病大鼠模型。
　　2、TLR4 mRNA的表達水平
　　Real-time PCR結果顯示，大鼠心臟、肝臟和腎臟的TLR4表達如下，心臟內(nèi)TLR4mRNA表達水平，在健康對照組和DM組中分別為1.104±0.189和1.079±0.503，健康對照組與DM組之間無統(tǒng)計學差異;肝臟內(nèi)TLR4 mRNA的表達水平，健康對照組和DM組分別為0.933±0.275和8.899±1.769，TLR4

6、 mRNA的表達水平明顯高于對照組;腎臟內(nèi)TLR4 mRNA的表達水平，健康對照組和DM組分別為1.032±0.125和2.766±0.663，DM組的TLR4 mRNA水平相比健康對照組明顯升高。
　　3、IL-1βmRNA的表達水平
　　Real-time PCR結果顯示，心臟的IL-1βmRNA表達健康對照組和DM組分別為1.025±0.263和1.120±0.311，健康對照組與DM組之間無顯著差異;肝臟的IL-1β

7、mRNA表達，健康對照組和DM組分別為1.175±0.275和3.940±0.958，DM組顯著高于健康對照組;腎臟的IL-1βmRNA健康對照組和DM組分別為1.125±0.222和6.900±1.700，DM組顯著高于健康對照組。
　　4、TNF-α mRNA的表達水平
　　心臟的TNF-α mRNA表達在健康對照組和DM組分別為1.075±0.359和1.080±0.449，健康對照組與DM組之間無顯著差異;肝臟的TN

8、F-αmRNA表達在健康對照組和DM組分別為1.150±0.311和4.060±1.097，DM組顯著高于健康對照組;腎臟的TNF-0mRNA表達在健康對照組和DM組分別為1.050±0.208和10.38±1.753，DM組顯著高于健康對照組。
　　5、HE染色結果
　　心臟、肝臟、腎臟組織HE染色結果顯示:12w時，與健康對照組相比，DM組心臟心肌纖維肥大，間質水腫，血管周有炎細胞;DM組肝臟脂肪炎癥細胞浸潤多于對照組;