組織工程神經(jīng)修復周圍神經(jīng)缺損過程中血管生成的實驗研究.pdf

1、蘇州大學學位論文獨創(chuàng)性聲明本人鄭重聲明：所提交的學位論文是本人在導師的指導下，獨立進行研究工作所取得的成果。除文中已經(jīng)注明引用的內(nèi)容外，本論文不含其他個人或集體已經(jīng)發(fā)表或撰寫過的研究成果，也不舍為獲得蘇州大學或其它教育機構的學位證書而使用過的材料。對本文的研究作出重要貢獻的個人和集體，均已在文中以明確方式標明。本人承擔本聲明的法律責任。論文作者簽名：立：! 立垂 ．日 期：蘭：! ≤．! 呈．壟組織工程神經(jīng)修復周圍神經(jīng)缺損過程中血管生成

2、的實驗研究 中文摘要組織工程神經(jīng)修復周圍神經(jīng)缺損過程中血管生成的實驗研究中文摘要目的：運用形態(tài)學觀察方法及基因芯片檢測的大數(shù)據(jù)分析方法，觀察和分析體外構建的組織T 程神經(jīng)體內(nèi)修復周圍神經(jīng)缺損過程中血管生成的自然生物學過程，并研究和探討其血管生成關鍵調(diào)控基因和內(nèi)在分子調(diào)控機制。方法：1 ．體外構建組織工程神經(jīng)。成功制備冷凍干燥的殼聚糖神經(jīng)導管的基礎上；以大鼠皮膚來源祖細胞( S K P s ) 分化的旋萬細胞( S K P —S C s

3、) 為支持細胞，內(nèi)置絲素纖維的殼聚糖導管為支架材料，在旋轉(zhuǎn)灌注式細胞培養(yǎng)系統(tǒng)( R C C S ) 中體外構建組織工程神經(jīng)。構建好的組織工程神經(jīng)用生理鹽水( N S ) 漂洗兩次，于N S 中保存?zhèn)溆谩? ．制備坐骨神經(jīng)缺損模型。S P F 級雌性S D 大鼠隨機分為4 組：T E N G ( 組織工程神經(jīng)) 組，A u t o g r a f t ( 自體神經(jīng)) 組，S c a f f o l d ( 殼聚糖神經(jīng)導管) 組，S h a

4、 m ( 假手術) 組。實驗設1 d 、4 d 、1 w 、2 w 、3 w 、4 w 、8 w 和1 2 w 共8 個時間點。常規(guī)手術制備大鼠坐骨神經(jīng)1 0 m m 缺損模型。3 ．體視顯微鏡觀察和拍照。動物麻醉后，游離并充分暴露橋接的組織工程神經(jīng)或白體神經(jīng)( 每個時間點：T E N G 組n = 3 ，A u t o g r a f t 組n = 3 ) 。組織工程神經(jīng)或自體神經(jīng)整體置于體視顯微鏡視野內(nèi)進行觀察，聚焦其表面血管進行拍

5、照。4 ．H E 染色和拍照。體視顯微鏡拍照完畢后，取出手術側(cè)組織工程神經(jīng)及橋接段自體神經(jīng)( 每個時間點：T E N G 組n = 3 ，A u t o g r a f t 組n = 3 ) 。動物標本經(jīng)過固定、切片，進行H E 染色。光鏡下對組織工程神經(jīng)和自體神經(jīng)中段的內(nèi)部血管進行觀察和拍照。5 ．M i c r o ．C T 掃描、血管重建及參數(shù)分析。動物麻醉后，進行M I C R O F I L 造影劑灌注( 術后4 w ：T E