人類前列腺癌中microRNA-497通過靶基因IKKβ調控NF-κB信號通路功能機制研究.pdf

1、目的：前列腺癌（PCa）是最常見的惡性腫瘤之一，前列腺癌相關死亡的主要原因是出現轉移的概率高。微小 RNA（microRNA）通過調節(jié)它們的靶基因，在癌癥發(fā)生、發(fā)展和轉移中起重要作用。本研究的目的是探討人類前列腺癌細胞中 miR-497通過靶基因 NF-κ B（Iκ Bs）抑制激酶β（IKKβ）調控 NF-κ B信號傳導途徑的功能機制，以此驗證miR-497/IKKβ/NF-κ B靶點在前列腺癌診療中的潛在應用價值。
　　方法：實

2、時RT-PCR用于檢測臨床收集的40對前列腺癌患者和健康對照受試者的血清樣品，以測定miR-497的表達水平。分子生物學功能實驗，采用細胞增殖試驗，細胞流式周期檢測，以及遷移和侵襲實驗來檢測轉染miR-497和anti-miR-497，沉默 IKKβ，應用IMD-0354（一種新型的IKKβ抑制劑）后的影響。我們使用了三種生物信息學網站預測方法，并采用熒光素酶報告基因檢測和 Western blo t分析證實 IK Kβ是 miR-49

3、7直接調控的靶基因。在轉染miR-497和anti-miR-497，沉默IKKβ，應用IMD-0354后，使用Western blot以檢測CDK8、MMP9、PSA的表達的情況。
　　結果：在我們的實驗中，與來自健康對照受試者的樣品相比較，實時RT-PCR結果分析顯示miR-497的表達水平在前列腺癌血清樣品中明顯下調。功能實驗中，細胞增殖CCK-8實驗發(fā)現，miR-497轉染后能夠分別在48和72小時顯著抑制PC3-AR細胞的

4、增殖能力。相反，在PC3-AR細胞中anti-miR-497的轉染可以促進細胞增殖。細胞流式周期實驗結果分析發(fā)現轉染miR-49724和48小時后，分別導致 PC3-AR細胞在 S和 G0/G1細胞周期的細胞數增加。與此相反，anti-miR-497轉染后則有S和G0/G1細胞周期的細胞數減少的效果。Transwell實驗檢測顯示，相對于對照組細胞，miR-497轉染后能夠導致PC3-AR細胞的遷移、侵襲能力下降。隨后，IKKβ被確認為

5、的miR-497靶基因。此外，IKKβ沉默后也能夠導致PC3-AR細胞增殖活性下降，細胞遷移和侵襲能力降低。最后，在PC3-AR細胞中應用一種新型的IKKβ抑制劑（IMD-0354）治療后，也得到了類似的細胞增殖、流式周期，細胞遷移和侵襲變化的結果。CDK8、MMP9、和PSA被證實參與這些過程之中。
　　結論：miR-497在人類前列腺腫瘤組織和血液樣品中一致性的表達降低，使得它們作為前列腺癌進展的標記物成為可能。此外，考慮mi

6、R-497，siR-IKKβ和 IMD-0354對細胞的增殖，遷移和侵襲的抑制作用，可以斷定了 miR-497在人前列腺癌的發(fā)生和發(fā)展中通過靶向調節(jié)IKKβ參與介導NF-κ B/MMP9/PSA信號通路。因此，miR-497可能成為一個新的診斷標志物，以部分取代或成為PSA在前列腺癌檢測中的補充。總之，這些結果表明，靶向的miR-497/IKKβ/NF-κ B相互作用或調控 miR-497的表達可能成為前列腺癌患者預防、診斷和治療的一個