脂肪間充質(zhì)干細胞移植對大鼠心肌缺血再灌注后炎癥反應及心臟功能的影響.pdf

1、目的:本課題擬將脂肪間充質(zhì)干細胞(ADSCs)移植于大鼠心肌梗死后缺血再灌注(MI/R)模型中，比較其對炎癥反應和心臟功能的影響及機制，尋找到心肌缺血再灌注損傷及心室重構(gòu)防治的新靶點，為干細胞應用于心梗后心力衰竭的防治提供有力的實驗依據(jù)及新的研究思路。
　　方法:1)建立大鼠MI/R模型，血液分析儀檢測血中中性粒細胞隨時間變化情況，HE染色、免疫熒光染色及流式細胞學分析心臟中中性粒細胞及巨噬細胞隨時間浸潤情況，同時確定ADSCs的

2、移植時機;2)體外分離、培養(yǎng)、鑒定大鼠ADSCs，不同時機靜脈注射到MI/R模型，28d后超聲心動圖及血流動力學檢測FS、EF、+dp/dtmax、-dp/dtmin等心臟功能指標，48h后TTC/Evans blue染色觀察心梗面積，HE染色、免疫熒光染色及流式細胞學分析心臟中中性粒細胞、巨噬細胞隨時間浸潤情況以及中性粒細胞CD11b、巨噬細胞CD163表達情況;3)48h后流式細胞術檢測心臟中巨噬細胞CD163表達情況及其對中性粒細

3、胞的吞噬。體外分離培養(yǎng)鑒定巨噬細胞及中性粒細胞，CFSE標記中性粒細胞，流式細胞學分析中性粒細胞24h凋亡情況;將巨噬細胞和中性粒細胞與ADSCs共培養(yǎng)，免疫熒光染色和流式細胞術檢測巨噬細胞CD163表達及其對中性粒細胞的吞噬情況。
　　結(jié)果:1)血中中性粒細胞數(shù)量隨時間動態(tài)變化，與假手術組相比，MI/R組中性粒細胞數(shù)量在12h后仍持續(xù)上升，同時心臟中大量中性粒細胞浸潤，在24h左右達到頂峰;2)與MI/R相比，ADSCs移植組2

4、8d后FS、EF、+dp/dtmax、-dp/dtmin等顯著升高，48h后心梗區(qū)面積、心梗區(qū)與危險區(qū)的比值顯著減小，其中再灌注時移植的效果優(yōu)于24h后移植。24h后與MI/R組相比，再灌注時ADSCs移植組心臟中中性粒細胞比例顯著減少，而中性粒細胞CD11b表達顯著升高;72h后與MI/R組相比，24h-ADSCs移植組心臟中白細胞及中性粒細胞比例顯著減少，而巨噬細胞比例及CD163陽性巨噬細胞所占比例明顯上升;3)48h后與MI/R

5、組相比，24h-ADSCs移植組中性粒細胞CD163陽性率明顯升高。在體外，與ADSCs共培養(yǎng)24h后的巨噬細胞CD163陽性率明顯增高;加入早期凋亡的中性粒細胞后，與ADSCs共培養(yǎng)24h后的巨噬細胞CFSE陽性率明顯增高，CFSE+CD163+的細胞明顯增加。
　　結(jié)論:1)MI/R早期炎癥反應以中性粒細胞浸潤為主，其數(shù)量隨時間動態(tài)變化，在24h達到頂峰，即炎癥在24h開始消退;2)ADSCs移植能夠減輕缺血再灌注損傷，減少梗