自噬對(duì)腦外傷引起的神經(jīng)細(xì)胞死亡及神經(jīng)功能障礙的影響.pdf

1、目的：研究自噬/溶酶體途徑對(duì)腦外傷后神經(jīng)細(xì)胞死亡和神經(jīng)功能障礙的影響并探討其相關(guān)機(jī)制。 方法：建立小鼠定量腦外傷（traumatic brain injury， TBI）動(dòng)物模型，運(yùn)用影響自噬體成熟的工具藥3—甲基腺嘌呤（3—methyladenine，3—MA）、布雷菲德菌素（Brefeldin A，BFA）側(cè)腦室（lateral cerebral ventricle）注射給藥，對(duì)3—MA組、BFA組及生理鹽水對(duì)照組用PI標(biāo)記

2、和體視學(xué)方法觀測損傷區(qū)及其周邊區(qū)（皮層與海馬）神經(jīng)細(xì)胞死亡情況，通過連續(xù)切片蘇木精染色和體視學(xué)軟件測量腦缺損體積（lesion volume，LV），并通過行為學(xué)試驗(yàn)方法（Motor test和Morris water maze）檢測TBI引起的神經(jīng)功能障礙，研究自噬對(duì)TBI引起的神經(jīng)細(xì)胞死亡和神經(jīng)功能障礙的影響；同時(shí)應(yīng)用免疫組織化學(xué)和免疫印記法檢測損傷側(cè)的腦皮質(zhì)與海馬中自噬/溶酶體途徑及凋亡信號(hào)通路相關(guān)蛋白Cathepsin—B，LC

3、3，Beclin-1，Caspase-3， Bcl-2，Bax的表達(dá)情況，研究自噬/溶酶體途徑影響TBI引起的神經(jīng)細(xì)胞死亡和神經(jīng)功能障礙的可能機(jī)制。 結(jié)果： （1） PI陽性細(xì)胞計(jì)數(shù)：TBI后1h和6h，3—MA組與生理鹽水組PI陽性細(xì)胞數(shù)均開始逐漸增加，12 h后明顯增加，但兩組之間無統(tǒng)計(jì)學(xué)差異，24 h陽性細(xì)胞數(shù)達(dá)高峰，且兩組的PI陽性細(xì)胞數(shù)有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異（P<0．05），TBI后48 h組仍有大量的PI陽性細(xì)胞，但3

4、—MA組與生理鹽水組比較無統(tǒng)計(jì)學(xué)差異；同樣，BFA組與生理鹽水組比較，TBI后24 h，兩組的PI陽性細(xì)胞數(shù)有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異（P<0．05）。 （2） LV檢測：與生理鹽水組比較，3—MA組、BFA組腦外傷后LV顯著減?。≒<0．05）； （3）行為學(xué)檢測：與生理鹽水組比較，3—MA組和BFA組在TBI后24 h均能改善運(yùn)動(dòng)功能（P<0．05），48 h以后差異不顯著；3—MA組在TBI后7d到10 d能改善學(xué)習(xí)記憶能力（P

5、<0．05）； （4）蛋白表達(dá)檢測：TBI后24 h和48h，3—MA組相對(duì)與生理鹽水組Cathepsin—B，Caspase-3表達(dá)減少（P<0．05），Beclin-1/Bcl-2的比值減?。≒<0．05），Bcl-2/Bax的比值增大（P<0．05）；與生理鹽水對(duì)照組比較，TBI后24h和48 h BFA組LC3Ⅱ/LC3Ⅰ的比值減小（P<0．05）。 結(jié)論： 1．自噬/溶酶體途徑參與了TBI后的病理生理過