蜘蛛香素E對人肝癌HepG2細胞增殖、侵襲和遷移的影響.pdf

1、目的:
　　探究蜘蛛香環(huán)烯醚萜類化合物蜘蛛香素E對HepG2腫瘤細胞的體外增殖抑制作用以及蜘蛛香素E對HepG2腫瘤細胞的侵襲和遷移的影響;同時進一步探究蜘蛛香素E對MAPK/ERK信號通路的作用來說明其作用機制。
　　方法:
　　1.采用MTT比色法檢測蜘蛛香素E在12、10、8、6、5、4μg/mL濃度和1、12、24、48小時時間點對HepG2腫瘤細胞的增殖抑制情況，對以后的實驗設(shè)計給予支持;2.以劃痕實驗、Tr

2、answell小室侵襲、遷移實驗、明膠酶譜實驗考察不同濃度蜘蛛香素E對HepG2腫瘤細胞侵襲和遷移的影響;3.以同質(zhì)性、異質(zhì)性粘附實驗考察不同濃度蜘蛛香素E對HepG2腫瘤細胞粘附能力的影響;4.采用Western Blot法考察經(jīng)蜘蛛香素E12、6、3μg/mL作用后HepG2腫瘤細胞ERK1/2、MMP-2、p-ERK1/2蛋白的表達情況。
　　結(jié)果:
　　1.HepG2腫瘤細胞經(jīng)過不同濃度的蜘蛛香素E作用不同時間后，腫

3、瘤細胞的增殖均被一定的抑制，而且蜘蛛香素E的抑制作用明顯隨著藥物濃度和作用時間的增加而增強。蜘蛛香素E濃度為12μg/mL時，作用1、12、24、48小時HepG2腫瘤細胞存活率分別為:88.71％、82.42％、53.16％、48.25％。
　　2.劃痕實驗顯示HepG2腫瘤細胞經(jīng)蜘蛛香素E0μg/mL、6μg/mL、3μg/mL、1.5μg/mL作用48小時后傷痕寬度百分率分別為:51.97％、87.39％、76.34％、57

4、.04％，能明顯抑制腫瘤細胞的運動能力且有一定劑量相關(guān)性;Transwell小室侵襲/遷移實驗顯示HepG2腫瘤細胞經(jīng)蜘蛛香素E0μg/mL、12μg/mL、6μg/mL、3μg/mL作用后侵襲率（遷移率）分別為:100.00％(100.00％)、9.71％(21.97％)、52.39％(57.67％)、95.39％(97.28％)，說明蜘蛛香素E對腫瘤細胞的侵襲及遷移作用有明顯的抑制，且其作用強度隨著藥物濃度增加而增強;明膠酶譜實驗顯

5、示HepG2腫瘤細胞經(jīng)蜘蛛香素E0μ g/mL、12μg/mL、6μg/mL、3μg/mL作用24小時后基質(zhì)金屬蛋白酶MMP-2(MMP-9)表達率分別為:100.00％(100.00％)、13.56％(18.84％)、42.33％(34.06％)、39.07％(33.82％)，說明蜘蛛香素E對腫瘤細胞的基質(zhì)金屬蛋白酶MMP-2、MMP-9的分泌有明顯抑制，且其作用強度隨著藥物濃度增加而增強。
　　3.同質(zhì)性粘附實驗顯示HepG2

6、腫瘤細胞經(jīng)蜘蛛香素E0μg/mL、12μg/mL、6μg/mL、3μg/mL作用1小時后各組粘附率（未粘附率）分別為:100.00％(100.00％)、97.68％(103.12％)、99.00％(103.31％)、99.19％(93.35％)，說明經(jīng)蜘蛛香素E作用后，各組HepG2腫瘤細胞的同質(zhì)性粘附能力未見明顯影響;異質(zhì)性粘附實驗顯示HepG2腫瘤細胞經(jīng)蜘蛛香素E0μg/mL、12μg/mL、6μg/mL、3μg/mL作用1小時后的

7、粘附率分別為:100％、67.80％、76.18％、96.54％，說明經(jīng)蜘蛛香素E作用后，各組HepG2腫瘤細胞的異質(zhì)性粘附能力被一定程度抑制，且作用隨著藥物濃度增加而增強。
　　4.Western Blot實驗顯示HepG2腫瘤細胞經(jīng)蜘蛛香素E0μg/mL、12μg/mL、6μg/mL、3μg/mL作用后MMP-2、ERK1/2、p-ERK1/2蛋白的表達率和ERK1/2活化率分別為:MMP-2(100.00％、63.17％、1

8、05.45％、100.43％)、 ERK1/2(100.00％/100.00％、95.22％/97.73％、92.18％/99.02％、94.79％/99.96％)、p-ERK1/2(100.00％/100.00％、70.54％/85.95％、85.28％/88.52％、101.31％/94.48％)、ERK1/2活化率(28.10％/32.29％、20.82％/28.40％、26.00％/28.87％、30.03％/30.52％)，說