鯔魚雌雄基因組DNA差異分析及性腺發(fā)育相關(guān)功能基因的克隆.pdf

1、本研究利用RAPD和AFLP分子標(biāo)記技術(shù)，對雌雄鯔魚基因組DNA的差異性進(jìn)行了探討和分析，尋找其性別特異性DNA分子標(biāo)記。同時(shí)利用PCR方法從性腺中克隆了兩個(gè)與性腺發(fā)育相關(guān)的功能基因—P450芳香化酶基因和piwi相關(guān)基因的cDNA片段，為探討其性腺分化發(fā)育的機(jī)制打下基礎(chǔ)。首先利用400條RAPD隨機(jī)引物對雌雄鯔魚的基因組DNA進(jìn)行初步篩選，得到了雌性特異序列S226和雄性性別特異序列S60。對這兩條性別相關(guān)的差異序列進(jìn)行驗(yàn)證后，認(rèn)為它

2、們不是與性別相關(guān)的具有穩(wěn)定性和可遺傳性的性別特異性探針。利用64對AFLP引物對雌雄鯔魚的基因組DNA進(jìn)行了差異性分析，得到了三條性別相關(guān)的序列：M5，M47，M47。但是經(jīng)過進(jìn)一步的驗(yàn)證后，排除了其為性別特異性探針的可能性。以鯔魚卵巢cDNA為模板，用PCR的方法克隆得到了P450aromA的1543bp的cDNA序列，同時(shí)也克隆到了piwi相關(guān)基因的1237bp的cDNA序列。將P450aromA的cDNA序列進(jìn)行翻譯，可推導(dǎo)出43

3、4個(gè)氨基酸，并且cDNA序列含有236bp的3’非編碼區(qū)，在poly(A)前18bp處存在AGTAAA加尾信號。鯔魚piwi相關(guān)基因的cDNA序列可推導(dǎo)出412個(gè)氨基酸，利用DNAstar與人、小鼠、果蠅、線蟲和斑馬魚的piwi的氨基酸序列進(jìn)行同源性分析，發(fā)現(xiàn)鯔魚PIWI與斑馬魚的PIWI的同源性最高，為75.5％；與人、小鼠、果蠅和線蟲的同源性較低，在30.5％-58.8％之間。進(jìn)化樹分析也表明鯔魚的piwi相關(guān)基因與斑馬魚的ziwi