利用微衛(wèi)星標記探討壇紫菜的遺傳多樣性.pdf

1、參考Wattier等(2000)的方法從壇紫菜葉狀體中提取基因組DNA，并用CTAB/NaCl加以純化，得到質量較高的DNA。經紫外分光光度計檢測其OD260/OD280比值為1.89～1.95；瓊脂糖凝膠電泳檢測其大小約為23Kb且無RNA污染，適用于微衛(wèi)星分子標記研究。根據胡則輝等(2006)報道的壇紫菜微衛(wèi)星DNA序列設計特異引物，進行壇紫菜微衛(wèi)星的PCR擴增反應。擴增產物經聚丙烯酰胺凝膠電泳并采用Brant等(1991)的銀染方

2、法染色。結果表明，在所設計的25對引物中有7對擴增出了較好的DNA圖譜，且僅有3對引物得到了3條可區(qū)分壇紫菜野生種及2個優(yōu)良群體(生長快型、高蛋白型)的差異性條帶：25＃-231、14＃-302和4＃-117，其中25＃-231與14＃-302兩差異條帶經純化、克隆及測序后，根據特征帶的序列和原引物序列重新設計引物并進行PCR擴增反應，電泳結果表明這兩條帶確實可以作為生長快群體及野生種群體的特征分子標記。 本研究同時還使用15對

3、微衛(wèi)星引物對壇紫菜4個非養(yǎng)殖群體80個樣品進行了遺傳多樣性分析，擴增的總位點數為39個，其中多態(tài)性位點為29個，占74.4％。在這4個群體中，平均有效等位基因數為1.3806(1.3233～1.5163)，平均遺傳雜合度為0.2593(0.2178～0.33 10)，平均PIC值為0.4833(0.4808～0.4878)。結果表明，本實驗所用的15個微衛(wèi)星位點具有較豐富的多態(tài)性，顯示了這4個壇紫菜非養(yǎng)殖群體的遺傳多樣性。用Popgen

4、32軟件構建4個壇紫菜群體間的Nei’s遺傳距離矩陣，結果表明，4個壇紫菜群體的Nei’s遺傳相似系數在0.8933～0.9617之間，Nei’s遺傳距離在0.0390～0.1128之間。AMOVA結果說明壇紫菜遺傳多樣性主要體現在個體的遺傳差異上。根據Nei’s遺傳距離矩陣通過MEGA 4.0軟件用UPGMA法構建4個壇紫菜群體間的聚類圖。結果表明生長于平潭縣同一島上的陽面和陰面群體首先聚在一起，個體之間的遺傳差異很小(相似系數高達0