己酮可可堿通過激活Nrf2-ARE信號通路改善老年大鼠肝臟功能.pdf

1、衰老的肝臟通常伴有形態(tài)改變以及由于脂類堆積、脂肪變性和肝纖維化等因素引起的肝損傷。研究表明，氧化應激是衰老引起器官和細胞功能下降的因素之一。氧化應激損傷生物大分子，減少蛋白質的合成，增加細胞凋亡信號傳導，促進蛋白質的降解。所以，抗氧化應激可能對衰老引起的肝損傷具有一定的改善防御作用。核因子E2相關因子2（Nrf2）可通過抗氧化反應元件（ARE）誘導一系列的II相解毒酶基因。激活的Nrf2能夠上調多種II相解毒酶，如血紅素加氧酶-1（HO

2、-1）和NAD（P）H:醌氧化還原酶1（NQO1）等，這些Nrf2依賴的基因產物能夠保護細胞氧化或外源性損傷。因此，Nrf2-ARE途徑是機體重要的抗氧化防御系統之一，激活Nrf2-ARE途徑可能對機體具有保護作用。研究顯示，己酮可可堿（PTX）作為一個非特異性磷酸二酯酶抑制劑，是各種神經遞質的調節(jié)劑。近年來研究顯示PTX也具有抗氧化應激作用。然而，PTX是否能夠通過激活肝臟Nrf2-ARE途徑，對衰老的肝細胞起到抗氧化應激的保護作用，

3、目前尚不清楚。
　　目的：探討長期PTX處理對老年大鼠肝臟形態(tài)結構和肝功能的影響及Nrf2-ARE抗氧化應激途徑參與的機制。
　　方法：成年雄性SD大鼠共30只隨機分成3組。6月齡組（6Mon， n=10），24月齡組（24Mon， n=10）和24月齡腹腔己酮可可堿處理組（24Mon-PTX，n=10）。24Mon-PTX組大鼠在大鼠21月齡時腹腔注射己酮可可堿，劑量50mg/kg（0.9％生理鹽水溶液），每日1次，共計給

4、藥12周（84天）。6Mon組和24Mon組大鼠同時只腹腔注射給予0.9%生理鹽水溶液。每組各5只大鼠用于HE染色和免疫組織化學染色，收集靜脈血用于肝功能指標測定，另外5只大鼠用于氧化應激參數、實時定量PCR和免疫印跡檢測。
　　結果：
　　1、 HE染色結果
　　6月齡大鼠肝細胞結構清晰完整，老年24月齡大鼠肝細胞形態(tài)結構模糊、肝細胞肥大、數目減少、結締組織增生，長期PTX處理后上述形態(tài)變化均顯著改善。
　　2

5、、肝功能檢測結果
　　與6月齡大鼠相比，老年24月齡大鼠血液谷丙轉氨酶（ALT）（P<0.01）、谷草轉氨酶（AST）（P<0.01）和總膽紅素（TBiL）（P<0.01）的含量顯著增加，白蛋白（ALb）的含量顯著降低（P<0.01），長期PTX處理后上述指標明顯改善（P<0.01），但未達到6月齡組大鼠水平（P<0.01）。
　　3、氧化應激參數結果
　　與6月齡大鼠相比，老年24月齡大鼠肝臟MDA水平顯著升高（P<

6、0.01），GSH水平顯著降低（P<0.01），長期TPX處理后MDA水平顯著降低（P<0.01），GSH水平顯著升高（P<0.01），但未達到6月齡組大鼠水平（P<0.01）。
　　4、實時定量PCR檢測結果
　　與6月齡大鼠相比，老年24月齡大鼠肝臟Nrf2 mRNA、HO-1 mRNA和NQO1 mRNA的表達顯著降低（P<0.01），長期PTX處理后上述指標表達明顯增加（P<0.01），但未達到6月齡組大鼠水平（P<

7、0.01）。
　　5、免疫印跡檢測結果
　　與6月齡大鼠相比，老年24月齡大鼠肝臟Nrf2、HO-1和NQO1蛋白的表達顯著降低（P<0.01），長期PTX處理后上述蛋白表達明顯增加（P<0.01），但未達到6月齡組大鼠水平（P<0.01）。
　　6、免疫細胞化學檢測結果
　　與6月齡大鼠相比，老年24月齡大鼠肝臟Nrf2、HO-1和NQO1蛋白的平均光密度值（AOD）顯著降低（P<0.01），長期PTX處理后上