SHP-2基因轉(zhuǎn)染骨髓間充質(zhì)干細胞修復大鼠骨缺損的實驗研究.pdf

1、目的：
　　骨缺損的再生主要依靠骨自身的修復能力。骨組織雖然具有強大的再生能力，但因各種原因?qū)е碌拇竺娣e骨缺損仍是臨床中比較棘手的問題。在組織工程中，生長因子是誘導成骨能力的重要媒介。骨組織工程利用生長因子誘導細胞成骨，并聯(lián)合支架材料用于骨缺損，已經(jīng)被臨床和科研廣泛采用。目前在組織工程中應用較為廣泛的生長因子主要有骨形態(tài)發(fā)生蛋白、血管內(nèi)皮生長因子、轉(zhuǎn)化生長因子等。但它們都存在著相應的缺點和弊端，難以完美滿足骨組織過工程發(fā)展的需要。

2、而我們通過文獻研究發(fā)現(xiàn)目前有多項研究報道SHP-2基因可以有效地促進破骨細胞分化，并參與成骨分化細胞通路，且該基因敲除的小鼠出現(xiàn)了骨發(fā)育遲緩障礙，因此我們預測該基因可以促進成骨細胞分化和骨生成，并通過實驗證實這一假設
　　方法：
　　使用PCR方法擴增SHP-2基因，構(gòu)建SHP-2基因慢病毒表達載體，并轉(zhuǎn)染大鼠骨髓間充質(zhì)干細胞。根據(jù)細胞狀態(tài)設計4個實驗組，分別為：單純BMSCs組，經(jīng)成骨細胞誘導液誘導的BMSCs組，經(jīng)SHP

3、-2基因修飾的BMSCs組和成骨細胞誘導液聯(lián)合SHP-2基因修飾的BMSCs組，四組細胞進行體外培養(yǎng)，并在不同的培養(yǎng)階段利用PCR、Western檢測定各組成骨標志物的表達，堿性磷酸酶和茜素紅染色檢測成骨活性。制作大鼠顱骨缺損模型,將4組細胞/磷酸三鈣復合物植入到顱骨缺損處，取材后將組織進行放射學檢查、HE、Masson染色和免疫組織化學染色鑒定骨修復的效果。
　　結(jié)果：
　　SHP-2慢病毒表達載體轉(zhuǎn)染大鼠骨髓間充質(zhì)干細胞

4、后持續(xù)有效的增加了SHP-2在細胞內(nèi)的表達。體外實驗中，SHP-2基因轉(zhuǎn)染BMSCs組和成骨細胞誘導液聯(lián)合SHP-2基因修飾的BMSCs組成骨標志物較其他組表達為高。在體內(nèi)實驗中，植入后8周大體組織學和影像學檢查表明,SHP-2基因轉(zhuǎn)染組和SHP-2基因轉(zhuǎn)染聯(lián)合成骨細胞誘導液誘導組在成骨標志物表達和促進骨組織生成方面多于其他組。
　　結(jié)論：
　　SHP-2高表達可促進大鼠骨髓間質(zhì)干細胞在體外向成骨細胞分化。SHP-2基因轉(zhuǎn)染