DNA甲基化在氯乙烯致大鼠肝細(xì)胞遺傳損傷中的作用.pdf

1、目的：
　　檢測(cè)氯乙烯對(duì)大鼠DNA損傷作用，測(cè)定大鼠的全基因組DNA甲基化水平，檢測(cè)癌基因KRAS，損傷修復(fù)基因CDKN2A、RASSF1A，DNA烷化損傷修復(fù)基因MGMT，抑癌基因SYK基因啟動(dòng)子區(qū)甲基化水平及mRNA的表達(dá)量改變，探討氯乙烯致癌在遺傳機(jī)制和表觀(guān)遺傳機(jī)制的關(guān)系。
　　方法：
　　選取96只健康大鼠，按體重隨機(jī)分成4組，每組24只，分別為陰性對(duì)照組和低劑量(5mg/kg)、中劑量(25mg/kg)、高劑

2、量(125mg/kg)三個(gè)氯乙烯染毒劑量組；腹腔注射，隔日染毒，每周三次。每組大鼠分別于6、8、12周隨機(jī)處死8只，取其肝臟，應(yīng)用彗星實(shí)驗(yàn)評(píng)價(jià)肝細(xì)胞DNA損傷水平，DNA甲基化定量檢測(cè)試劑盒（比色法）檢測(cè)大鼠肝細(xì)胞全基因組甲基化水平，選用甲基化特異性PCR（QMSP）和實(shí)時(shí)熒光定量PCR（QPCR）分別檢測(cè)上述基因啟動(dòng)子區(qū)甲基化水平及mRNA的表達(dá)量。采用SPSS22.0對(duì)實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析，本次實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)符合正態(tài)或近似正態(tài)分布，采用單

3、因素方差分析ANOVA進(jìn)行組間比較，兩兩比較采用LSD法；相關(guān)性分析采用雙變量相關(guān)分析，選用Pearson相關(guān)系數(shù)，顯著性水平為α=0.05。
　　結(jié)果：
　　1、氯乙烯可誘發(fā)大鼠肝臟組織肝細(xì)胞壞死，肝脂肪變性，肝硬化等組織病理變化，大鼠肝細(xì)胞DNA損傷水平隨著染毒劑量的增加和染毒時(shí)間的延長(zhǎng)而升高，肝細(xì)胞全基因組甲基化水平在染毒組中明顯均高于對(duì)照組，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）。
　　2.大鼠肝細(xì)胞5種基因啟動(dòng)子區(qū)

4、甲基化水平的改變：
　　2.1.各組別之間比較：氯乙烯染毒6周時(shí)，各染毒組大鼠肝細(xì)胞MGMT基因啟動(dòng)子區(qū)甲基化水平均高于對(duì)照組（P＜0.05），mRNA的表達(dá)量隨著劑量的增加而升高；染毒8周時(shí)，染毒組KRAS、SYK甲基化水平隨著染毒劑量的增加而下降，SYK mRNA的表達(dá)量隨著染毒劑量的增加而升高；染毒12周時(shí)，RASSF1A、MGMT甲基化水平隨著染毒劑量的增加而明顯升高，RASSF1A mRNA表達(dá)量隨著染毒劑量的增加而下降

5、。
　　2.2.各染毒時(shí)間之間比較：對(duì)照組中，KRAS、CDKN2A、RASSF1A、MGMT、SYK基因啟動(dòng)子區(qū)甲基化水平及mRNA表達(dá)量在各染毒時(shí)間差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05）；低劑量組中，MGMT、SYK甲基化水平隨著染毒時(shí)間的延長(zhǎng)而下降，MGMT mRNA表達(dá)量隨著染毒時(shí)間的延長(zhǎng)而升高；中劑量組中，KRAS、MGMT、SYK甲基化水平在8周和12周時(shí)低于6周（P＜0.05），mRNA表達(dá)量隨著染毒時(shí)間的延長(zhǎng)而升高；高劑

6、量組中，CDKN2A、RASSF1A基因甲基化水平在6周和8周時(shí)低于12周（P＜0.05），RASSF1A mRNA表達(dá)量在6周和8周明顯高于12周（P＜0.05）。
　　3.大鼠肝細(xì)胞DNA損傷和相關(guān)基因甲基化相關(guān)性分析：大鼠肝細(xì)胞DNA損傷與RASSF1A、MGMT基因啟動(dòng)子區(qū)甲基化水平呈正相關(guān)關(guān)系（P＜0.05）。
　　結(jié)論：
　　1.氯乙烯可引起大鼠肝細(xì)胞DNA損傷增加，全基因組甲基化水平升高。
　　2.

7、氯乙烯可引起KRAS和SYK基因啟動(dòng)子區(qū)甲基化水平的下降，CDKN2A、MGMT甲基化水平的升高。在短期、低劑量下，氯乙烯可引起RASSF1A啟動(dòng)子區(qū)甲基化水平下降，mRNA表達(dá)量增加；但當(dāng)染毒時(shí)間延長(zhǎng)，染毒劑量增加時(shí)，RASS1A啟動(dòng)子區(qū)甲基化水平升高，mRNA表達(dá)量下降。
　　3.氯乙烯引起RASSF1A、MGMT基因啟動(dòng)子區(qū)甲基化水平的升高可能影響大鼠肝細(xì)胞DNA損傷的修復(fù)，使大鼠肝細(xì)胞DNA損傷增加。
　　本課題為山