高糖影響大鼠心肌細(xì)胞內(nèi)脂素表達(dá)的機(jī)制.pdf

1、目的：內(nèi)脂素(visfatin)是在2005年被確定的脂肪因子，它在動(dòng)物的進(jìn)化過(guò)程中保持高度的不變。已經(jīng)證實(shí)內(nèi)脂素為胰島素的類(lèi)似物，它能降低血漿葡萄糖的濃度，增加細(xì)胞因子的產(chǎn)生以及誘導(dǎo)血管的生成，其發(fā)揮作用可能與脂肪因子的致炎等做用相關(guān)[1]。
　　糖尿病(diabetes mellitus，DM)心肌病是糖尿病患者重要的并發(fā)癥之一，與糖尿病患者的高心力衰竭發(fā)生率和高死亡率密切相關(guān)。內(nèi)脂素的促增殖、促炎等作用可能在糖尿病心肌病的病

2、理過(guò)程中發(fā)揮一定的作用。內(nèi)脂素在心血管系統(tǒng)中的作用研究很多，但迄今尚無(wú)高糖對(duì)心臟細(xì)胞表達(dá)、合成內(nèi)脂素影響的研究。本實(shí)驗(yàn)的前期部分表明內(nèi)脂素的分泌同高糖存在濃度-時(shí)間依賴(lài)性，但介導(dǎo)高糖影響內(nèi)脂素分泌的細(xì)胞通路一直不明。
　　大量研究表明在糖尿病腎病的過(guò)程中，MAPK通路在高糖的作用下激活并活化多種核轉(zhuǎn)錄因子，導(dǎo)致目的基因的表達(dá)增加，但MAPK通路在糖尿病心肌病中的作用尚無(wú)深入的研究。本實(shí)驗(yàn)擬探討不同的MAPK通路在高糖刺激內(nèi)脂素分泌

3、中的作用機(jī)制，為臨床治療糖尿病，降低糖尿病的心肌損害，提供重要的理論依據(jù)和指導(dǎo)。
　　前期試驗(yàn)已經(jīng)證明了SD大鼠心肌細(xì)胞表達(dá)內(nèi)脂素，顯示在一定時(shí)間范圍內(nèi)，高糖刺激大鼠心肌細(xì)胞內(nèi)脂素的表達(dá)呈濃度-時(shí)間依賴(lài)性。將心肌細(xì)胞暴露于5.5mmol/L，10mmol/L，30mmol/L，50mmol/L培養(yǎng)48h，結(jié)果暴露于50mmol/L的心肌細(xì)胞內(nèi)脂素表達(dá)的趨勢(shì)高于細(xì)胞暴露于30mmol/L的，但沒(méi)有達(dá)到統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。使用30mmol/l

4、的血糖對(duì)心肌細(xì)胞進(jìn)行處理，分別于6h，12h，24h，48h進(jìn)行檢測(cè)，結(jié)果顯示心肌內(nèi)脂素的表達(dá)在24h達(dá)峰。
　　方法：無(wú)菌試驗(yàn)條件下提取新生2-3天的Sprague-Dawley(SD)大鼠心肌細(xì)胞進(jìn)行原代培養(yǎng)，48h的含血清培養(yǎng)，24h后撤血清培養(yǎng)，選取形態(tài)及生長(zhǎng)狀態(tài)良好的心肌細(xì)胞隨機(jī)分為5組：(1)低糖對(duì)照組(5.5mmol/L)、(2)高糖30mmol/L組、(3)高糖30mmol/L+ERK1/2抑制劑(PD980591

5、0μmol/L)組、(4)高糖30mmol/L+JNK抑制劑(SP60012510μmol/L)組、(5)高糖30mmol/L+p38MAPK抑制劑(SB20358010μmol/L)組。該研究分別將以下抑制劑：SP600125(JNK通路抑制劑)、SB203580(p38通路抑制劑)和PD98059(ERK1/2抑制劑)提前30min加入心肌細(xì)胞培養(yǎng)液中進(jìn)行預(yù)處理，然后與高糖(30mmol/1)共同培養(yǎng)24小時(shí)。應(yīng)用RT-PCR技術(shù)檢

6、測(cè)內(nèi)脂素mRNA的表達(dá)水平，應(yīng)用Elisa技術(shù)檢測(cè)培養(yǎng)液中內(nèi)脂素蛋白的含量。
　　結(jié)果：高糖條件下，心肌細(xì)胞經(jīng)預(yù)處理，結(jié)果顯示：高糖+SB203580組和低糖濃度組對(duì)比心肌細(xì)胞內(nèi)脂素mRNA和細(xì)胞培養(yǎng)液內(nèi)脂素蛋白表達(dá)有明顯的區(qū)別，但與高糖組相比較有明顯的降低；高糖+SP600125組及高糖+PD98059組分別較低糖濃度組有明顯的區(qū)別，但與高糖組相比較無(wú)明顯差異。
　　結(jié)論：p38 MAPK是細(xì)胞在高糖誘導(dǎo)的心肌細(xì)胞內(nèi)脂素表