肌醇六磷酸對(duì)人結(jié)腸癌細(xì)胞系HT-29細(xì)胞分化的影響及作用機(jī)制的探討.pdf

1、目的：不同濃度的IP6作用于人結(jié)腸癌細(xì)胞系HT-29，觀察IP6對(duì)癌細(xì)胞分化的影響，并對(duì)其機(jī)制進(jìn)行探討。 方法：將不同濃度的IP6(對(duì)照組，1.8mM，3.3mM)作用HT-29細(xì)胞不同時(shí)間(1d,3d,5d)，分別進(jìn)行如下研究： 1、使用透射電鏡觀察IP6對(duì)HT-29細(xì)胞超微形態(tài)的影響。 2、IP6作用3d后，使用流式細(xì)胞儀分析各組細(xì)胞周期。 3、應(yīng)用RT-PCR法檢測(cè)IP6對(duì)HT-29細(xì)胞內(nèi)c-Myc

2、 mRNA表達(dá)的影響。 4、使用免疫細(xì)胞化學(xué)法檢測(cè)IP6對(duì)HT-29細(xì)胞內(nèi)Rb、c-Myc蛋白表達(dá)的影響。 5、測(cè)定堿性磷酸酶比活性。 結(jié)果： 1、3.3mM IP6持續(xù)作用后，透射電鏡下可以觀察到細(xì)胞結(jié)構(gòu)發(fā)生改變，出現(xiàn)核固縮、細(xì)胞器豐富、微絨毛增多等分化趨勢(shì)。 2、IP6對(duì)HT-29細(xì)胞細(xì)胞周期有明顯的阻滯作用，并呈劑量依賴關(guān)系。流式細(xì)胞儀分析，G0/G1期細(xì)胞明顯增多，S期、G2/M期細(xì)胞則相

3、應(yīng)減少。 3、RT-PCR和免疫細(xì)胞化學(xué)實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示，與對(duì)照組相比，各濃度IP6均能使細(xì)胞內(nèi)e-Myc mRNA和蛋白的表達(dá)減少(P＜0.05)。 4、免疫細(xì)胞化學(xué)實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明，IP6能夠上調(diào)Rb蛋白的表達(dá)(P＜0.05)。 5、IP6作用HT-29細(xì)胞后，堿性磷酸酶比活性明顯增強(qiáng)。 結(jié)論：IP6能夠促使HT-29細(xì)胞向正常細(xì)胞轉(zhuǎn)化。IP6可能通過(guò)上調(diào)Rb蛋白的表達(dá)，下調(diào)c-Mye蛋白的表達(dá)，阻滯細(xì)胞周期，誘導(dǎo)細(xì)