人參皂苷Rg1拮抗D-半乳糖致大鼠腦衰老及機(jī)制研究.pdf

1、目的:干細(xì)胞衰老是生物體衰老的最新學(xué)說,調(diào)控干細(xì)胞衰老對延緩機(jī)體衰老和防治老年性疾病至關(guān)重要。神經(jīng)干細(xì)胞（NSCs）衰老與神經(jīng)系統(tǒng)退行性疾病密切相關(guān)。我們前期工作證明,人參皂苷Rg1是“補(bǔ)氣”中藥人參重要的抗衰老成分,有益智與延緩腦衰老作用。人參皂苷Rg1調(diào)控NSCs衰老研究僅見本課題組報道，但其分子機(jī)理還不清楚。本課題將干細(xì)胞最新理論和技術(shù)與中醫(yī)學(xué)抗衰老理論和對干細(xì)胞認(rèn)識緊密結(jié)合起來，通過構(gòu)建NSCs體內(nèi)/外衰老模型，研究人參皂苷Rg

2、1調(diào)控NSC衰老與延緩腦衰老的關(guān)系。課題旨在闡釋中醫(yī)“氣血理論”和“補(bǔ)氣延衰”途徑調(diào)控NSC衰老的現(xiàn)代生物學(xué)機(jī)理，對防治神經(jīng)系統(tǒng)退行性疾病提供理論與實(shí)驗(yàn)室依據(jù)。
　　方法:
　　1.人參皂苷Rg1拮抗D-半乳糖致大鼠腦衰老作用的研究
　?。?）實(shí)驗(yàn)分組：雄性SD大鼠隨機(jī)分為4組每組10只。腦衰老模型組：大鼠皮下注射D-半乳糖（120mg/kg）qd×42；Rg1腦衰老模型組：在腦衰老模型復(fù)制同時，從16d起腹腔注射人參

3、皂苷Rg1（20mg/kg）qd×27；Rg1正常組：大鼠皮下注射等量生理鹽水，16d起開始腹腔注射人參皂苷Rg1（20mg/kg）qd×27；正常組：注射等時與等量生理鹽水。模型復(fù)制結(jié)束或藥物注射完成第2d進(jìn)行相關(guān)實(shí)驗(yàn)。
　　（2）檢測指標(biāo)：水迷宮實(shí)驗(yàn)檢測各組大鼠的空間記憶能力；β-半乳糖苷酶（SA-β-Gal）染色檢測腦切片；ELISA檢測海馬區(qū)組織IL-1、IL-6炎癥因子含量變化；比色法檢測海馬區(qū)組織抗氧化指標(biāo)SOD、GS

4、H變化；Southern blotting和PCR-ELISA方法檢測海馬區(qū)端粒長度和端粒酶活性變化；Western blotting及RT-PCR檢測海馬組織P53及p19、p21含量變化。
　　2.人參皂苷Rg1拮抗D-半乳糖致神經(jīng)干細(xì)胞衰老初步研究
　　提取 SD胎鼠大腦神經(jīng)干細(xì)胞（NSCs），離體培養(yǎng)，免疫熒光染色及流式細(xì)胞儀檢測NSCs及第三代培養(yǎng)細(xì)胞純度。
　?。?）實(shí)驗(yàn)分組：將第三代NSCs分為4組。正常

5、組：常規(guī)培養(yǎng)基培養(yǎng)96h；Rg1正常組：常規(guī)培養(yǎng)基培養(yǎng)48h，加人參皂苷Rg18μg/ml繼續(xù)培養(yǎng)48h；腦衰老模型組：常規(guī)培養(yǎng)基中加D-半乳糖10mg/ml作用48h，再常規(guī)培養(yǎng)基培養(yǎng)48h；Rg1抗NSCs衰老模型組：前48h同NSCs衰老模型組，后48h加人參皂苷Rg18μg/ml培養(yǎng)。
　　（2）檢測指標(biāo)：計數(shù)各組細(xì)胞成球數(shù)檢測增殖能力；神經(jīng)球β-半乳糖苷酶（SA-β-Gal）染色檢測細(xì)胞球衰老情況；比色法和流式細(xì)胞儀檢測

6、培養(yǎng)液中MDA與細(xì)胞內(nèi)ROS變化；RT-PCR檢測p19、p21、p53表達(dá)情況。
　　結(jié)果:
　　1.腦衰老模型組大鼠空間記憶能力減退，腦組織切片SA-β-Gal染色陽性顆粒增多，海馬區(qū)組織內(nèi)SOD活性降低，GSH含量減少，IL-1、IL-6含量增多，端粒長度縮短，端粒酶活性降低,P53、p19、p21含量增高。
　　2.Rg1拮抗D-半乳糖腦衰老模型組大鼠空間記憶能力有明顯改善，SA-β-Gal染色藍(lán)色顆粒減少，海

7、馬區(qū)組織內(nèi)SOD活性增高，GSH含量增多，IL-1、IL-6含量減少，端粒長度縮短受到阻止，端粒酶活性增高，P53、p19、p21含量降低。
　　3.Rg1正常組大鼠與正常組大鼠相比空間記憶能力增強(qiáng)，SA-β-Gal染色藍(lán)色顆粒減少，海馬區(qū)IL-1、IL-6含量減少。
　　4.神經(jīng)干細(xì)胞衰老模型組細(xì)胞增殖能力降低，神經(jīng)球β-半乳糖苷酶染色陽性率增高，培養(yǎng)基中MDA及細(xì)胞ROS增高，細(xì)胞內(nèi)p19、p21、p53含量增高。

8、>　　5.Rg1拮抗D-半乳糖神經(jīng)干細(xì)胞衰老模型組細(xì)胞增殖能力上升、神經(jīng)球β-半乳糖苷酶陽性率降低，培養(yǎng)基中MDA及細(xì)胞ROS下降，細(xì)胞p19、p21、p53含量下降；Rg1正常組與正常組相比，培養(yǎng)基中MDA及細(xì)胞ROS下降。
　　結(jié)論:
　　1.人參皂苷Rg1可能通過調(diào)節(jié)端粒系統(tǒng)、衰老相關(guān)基因、炎癥因子水平和抗氧化作用拮抗D-半乳糖致大鼠腦衰老。
　　2.人參皂苷Rg1抗腦衰老作用機(jī)制可能與拮抗D-半乳糖致氧化作用,