CYP2E1和GST基因雙元表達載體的構建及其在紫花苜蓿中的表達.pdf

1、隨著工業(yè)化的發(fā)展、城市化進程的深入，我國的環(huán)境污染不斷加劇。土壤環(huán)境污染物種類和數量在不斷增加，嚴重損害經濟發(fā)展和人體健康。目前，土壤污染修復主要有物理/化學修復和生物修復兩大類。植物修復是指為利用綠色植物去除環(huán)境中的污染物。與傳統(tǒng)修復技術相比，植物修復技術因具有更加快速、高效、費用低、便于推廣等優(yōu)點，近年來呈現出良好的發(fā)展前景。
　　本研究旨在利用基因工程技術將兩個基因轉入紫花苜蓿中以提高其對土壤重金屬和有機物復合污染的修復能力

2、;谷胱甘肽轉移酶基因GST和細胞色素氧化酶基因CYP2E1是兩種分別與重金屬和有機物抗性、積累相關的基因。目前，國內外尚未出現同時利用這兩個基因進行土壤修復的報道。
　　本實驗構建含有CYP2E1基因的植物表達載體:用目的基因替換表達載體pBI121上的Gus基因，構建P35S-CYP2E1-T35S表達盒，即質粒pBI121-CYP2E1。然后通過凍融法將表達載體pBI121-CYP2E1轉入含目的基因GST的農桿菌LBA440

3、4中。
　　本實驗選取“阿爾岡金”紫花苜蓿的下胚軸作為基因轉化受體，通過組織培養(yǎng)研究，篩選并優(yōu)化出胚性愈傷組織的誘導分化條件，構建并優(yōu)化出適合“阿爾岡金”的遺傳轉化再生體系。經共轉化將GST基因和CYP2E1基因導入“阿爾岡金”紫花苜蓿中。經共培養(yǎng)、選擇培養(yǎng)最終獲得了240株抗卡那霉素的轉基因植株。
　　篩選出的240株抗性植株應用PCR和RT-PCR進行分子學水平檢測后，對其轉基因植株的抗重金屬和有機物功能進行了鑒定。結果