利用家蠶絲腺生物反應器表達重組人乳鐵蛋白的研究.pdf

1、二零零九屆碩士學位論文利用家蠶絲腺生物反應器表達重組人乳鐵蛋白的研究學科專業(yè)研究方向指導教師研究生生物化學與分子生物學家蠶功能基因組夏慶友教授王振興中國重慶2009年5月利用家蠶絲腺生物反應器表達重組人乳鐵蛋白的研究生物化學與分子生物學專業(yè)碩士研究生王振興指導教師夏慶友教授摘要乳鐵蛋白(lactoferrin，LF)是一種分子量為80kDa的糖蛋白，具有廣泛的抗菌活性、顯著的抗病毒能力，以及抗腫瘤、抗炎癥、提高機體免疫等許多生物學功能，

2、被廣泛應用于醫(yī)藥、食品、化妝品乃至農業(yè)等諸多領域。然而，隨著人們對乳鐵蛋白產品的旺盛消費，傳統(tǒng)的提取方法己難以滿足日益增長的市場需求，故近年來研究人員開始探索利用轉基因等技術表達重組乳鐵蛋白，目前以酵母、昆蟲細胞、水稻、牛、羊等作為生物反應器，成功表達出了轉基因重組人乳鐵蛋白。盡管上述探索為利用生物反應器生產重組人乳鐵蛋白提供了有用借鑒和參考，但從酵母到哺乳動物細胞的基因工程表達系統(tǒng)存在細胞培養(yǎng)設備投資大、成本高和分離純化復雜等缺點，而

3、牛羊乳腺生物反應器盡管能大量生產具有與天然蛋白活性相近蛋白的優(yōu)勢，其研制時間長，前期投資大，并涉及許多技術領域，風險極高，許多問題還有待解決。因此，探索利用新型生物反應器生產重組人乳鐵蛋白的研究已成為當前該領域研究的重點和熱點之一。家蠶是迄今唯一被人類馴化和充分利用的昆蟲種類，其最重要的價值就是分泌蠶絲。經過長達數(shù)千年的自然選擇和人工馴化，家蠶的泌絲能力已有顯著提高，一頭蠶可分泌高達0.59的絲蛋白，遠超其他昆蟲。不僅如此，家蠶還具有高

4、等真核生物的蛋白質后修飾加工能力，以及大規(guī)模生產成本低、對人畜無毒害等優(yōu)勢，從而使其成為一種理想的新型生物反應器，有著巨大的開發(fā)潛力。近年來，包括本實驗室在內，國內外已有少數(shù)研究機構在家蠶生物反應器開發(fā)方面進行了許多探索，并取得重大突破。在此基礎上，本研究重點開展了利用家蠶絲腺生物反應器表達重組人乳鐵蛋白的系統(tǒng)性研究。人乳鐵蛋白基因的克隆及轉基因表達載體的構建提取人乳腺總RNA反轉錄獲得cDNA，以其為模板進行PCR擴增獲得人乳鐵蛋白完