一種新型超聲造影劑JD-95介導血管內皮生長因子基因治療心肌缺血的實驗研究.pdf

1、該研究著眼于將超聲造影劑從診斷技術拓展為用作載體、介導、輔助治療的新方法,并進行了一系列有益的探索.首先構建了血管內皮生長因子與增強型綠色熒光蛋白基因共表達載體,實驗了一種新型超聲造影劑JD-95經靜脈實時造影的可行性.然后進行了超聲造影劑JD-95介導血管內皮生長因子基因治療心肌缺血的體外和體內實驗,簡述如下. 第一部分一種新型超聲造影劑JD-95實時器官顯影的實驗研究目的一種新型超聲造影劑JD-95的實時器官顯影效果及其安全性的檢測

2、.方法6只實驗犬以微量注射泵靜脈滴注0.1ml/(kg·min)至0.3ml/(kg·min)不同劑量新型超聲造影劑JD-95,進行實時心肌、肝臟、腎臟聲學造影,監(jiān)測心率、左室收縮功能及血氣指標.結論新型超聲造影劑JD-95可以獲得良好的心肌、肝臟、腎臟聲學造影效果,對實驗犬無影響. 第二部分VEGF真核表達載體的構建及在內皮與心肌細胞內的表達目的 探討外源性VEGF165基因在內皮細胞與心肌細胞內表達的可行性.方法 構建了血管內皮生長

3、因子與增強型綠色熒光蛋白基因共表達載體pIRES2-EGFP-hVEGF165,以脂質體法轉染內皮細胞和心肌細胞,采用熒光顯微鏡檢測內皮細胞與心肌細胞中綠色熒光蛋白的表達,同時利用免疫組織化學方法檢測血管內皮生長因子的表達.結論 采用脂質體法可以成功地將外源性VEGF165基因轉染到內皮細胞與心肌細胞中,并進行表達,該研究為今后利用VEGF基因治療心肌缺血等疾病提供了實驗基礎.第三部分超聲破壞微泡造影劑介導VEGF基因轉染的體外實驗目的

4、 研究超聲破壞微泡造影劑的方法提高脂質體介導的VEGF基因在內皮細胞中轉染率的可行性.方法 脂質體介導VEGF基因轉染1小時后,將6孔板中的內皮細胞每孔加入造影劑10μL或100μL或500μL,然后暴露在超聲下30秒、60秒、90秒.超聲探頭(Sonos 5500,S3,1.3MHz,MI1.0)置于水槽中,距離培養(yǎng)板1cm.2天后,用熒光顯微鏡觀察標記基因EGFP的表達.結論 超聲破壞微泡造影劑可以提高脂質體介導的基因細胞轉染效率,