Cajal間質(zhì)細(xì)胞凋亡在先天性巨結(jié)腸癥及其同源病發(fā)病中的作用.pdf

1、目的：
　　先天性巨結(jié)腸癥(Hirschsprung's disease，HD)及其同源?。℉irschsprung's allied disease，HAD）是小兒外科常見(jiàn)的消化道運(yùn)動(dòng)功能障礙性疾病，正常消化道運(yùn)動(dòng)源自腸神經(jīng)節(jié)細(xì)胞、Cajal間質(zhì)細(xì)胞（interstitial cells of Cajal， ICCs）和平滑肌細(xì)胞的協(xié)同合作，研究證實(shí)ICCs與HD相關(guān)，但其具體機(jī)制尚不十分明確。本研究通過(guò)免疫熒光雙標(biāo)記技術(shù)檢測(cè)H

2、D及HAD結(jié)腸肌層ICCs的分布以及caspase-3和bcl-2的表達(dá)情況，確立不同病變腸管肌層中ICCs的凋亡情況，以探討其在先天性巨結(jié)腸癥及其同源病發(fā)生、發(fā)展中的作用。
　　方法：
　　選取河北醫(yī)科大學(xué)第二醫(yī)院2014年2月至2015年2月收治并手術(shù)治療的HD病兒15例和HAD病兒13例，所有病兒均經(jīng)肛管直腸測(cè)壓、鋇灌腸、乙酰膽堿酯酶染色及術(shù)后病理組織學(xué)檢查確診，切取HD病變結(jié)腸痙攣段、移行段及擴(kuò)張段和HAD近端與遠(yuǎn)端

3、的全層腸壁組織作為各實(shí)驗(yàn)組。另選取10例正常結(jié)腸病兒標(biāo)本作為對(duì)照組。應(yīng)用免疫熒光雙標(biāo)記技術(shù)檢測(cè)不同病變腸管肌層中ICCs分布密度以及ICCs中caspase-3和bcl-2的表達(dá)情況，并分別予以計(jì)數(shù)，應(yīng)用SPSS13.0統(tǒng)計(jì)學(xué)軟件予以統(tǒng)計(jì)分析，以P＜0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。同時(shí)，應(yīng)用電子透射顯微鏡觀(guān)察不同病變腸管肌層中ICCs超微結(jié)構(gòu)的凋亡樣改變。
　　結(jié)果：
　　1、不同病變腸管肌層ICCs的分布
　　應(yīng)用免疫熒

4、光技術(shù)檢測(cè)不同病變腸管及對(duì)照組肌層ICCs的分布密度（個(gè)/視野），與對(duì)照組（17.8±1.5）相比，HD組中痙攣段(5.8±1.1)、移行段（10.0±1.8）、擴(kuò)張段（13.1±2.1）和HAD組中遠(yuǎn)端（8.6±1.6）腸管肌層內(nèi)ICCs分布密度均明顯減少(P＜0.05);僅HAD組中近端腸管肌層內(nèi)ICCs分布密度（16.5±2.4）與對(duì)照組相比無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05）。HD組中各病變腸管肌層內(nèi)ICCs分布密度兩兩比較，差異均有統(tǒng)

5、計(jì)學(xué)意義(P＜0.05); HAD組中近端與遠(yuǎn)端相比也存在明顯差異(P＜0.05)。
　　2、不同病變腸管肌層ICCs中caspase-3的表達(dá)
　　應(yīng)用免疫熒光雙標(biāo)記技術(shù)檢測(cè)不同病變腸管肌層內(nèi)ICCs中caspase-3陽(yáng)性表達(dá)的百分率，與對(duì)照組6.3±4.3％相比，HD組中痙攣段77.6±13.8％、移行段53.6±10.2％及擴(kuò)張段31.9±8.0％和HAD組中近端23.6±6.8％與遠(yuǎn)端57.2±12.1％腸管內(nèi)ca

6、spase-3陽(yáng)性表達(dá)的ICCs百分率均明顯增高(P＜0.05);且以HD痙攣段升高最為顯著。
　　3、不同病變腸管肌層ICCs中bcl-2的表達(dá)
　　同法應(yīng)用免疫熒光雙標(biāo)記技術(shù)檢測(cè)不同病變腸管肌層ICCs中bcl-2陽(yáng)性表達(dá)的百分率，與對(duì)照組60.3±5.4％相比，HD組中痙攣段18.3±9.3％、移行段31.5±7.3％及擴(kuò)張段42.3±7.9％和HAD組中近端48.7±6.5％與遠(yuǎn)端38.5±6.7％腸管內(nèi)bcl-2陽(yáng)

7、性表達(dá)的ICCs百分率均明顯降低(P＜0.05);且以HD痙攣段減少為著。
　　4、ICCs分布與其caspase-3和bcl-2表達(dá)的相關(guān)性
　　HD組中結(jié)腸肌層內(nèi)ICCs的分布密度與caspase-3的表達(dá)呈負(fù)相關(guān)(r=-0.872，P＜0.01)、與bcl-2的表達(dá)呈正相關(guān)(r=0.676，P＜0.01)。
　　HAD組中結(jié)腸肌層內(nèi)ICCs的分布密度與caspase-3的表達(dá)呈負(fù)相關(guān)（r=-0.915，P＜0.0

8、1）、與bcl-2的表達(dá)呈正相關(guān)（r=0.575，P＜0.01）。
　　5、不同病變腸管肌層ICCs的超微結(jié)構(gòu)改變
　　電鏡觀(guān)察HD組、HAD組均可見(jiàn)ICCs的超微結(jié)構(gòu)已發(fā)生凋亡樣改變，呈現(xiàn)核染色質(zhì)濃縮，體積縮小，電子密度增加，邊集于核膜下，厚薄不均勻;但HD組中ICCs核膜欠完整，細(xì)胞器數(shù)量明顯變少，細(xì)胞質(zhì)可出現(xiàn)空泡變性，線(xiàn)粒體、內(nèi)質(zhì)網(wǎng)、溶酶體明顯腫脹，甚至空泡變性;HAD組中ICCs核膜完整，細(xì)胞器數(shù)量稍減少，線(xiàn)粒體、內(nèi)

9、質(zhì)網(wǎng)、溶酶體稍腫脹。
　　結(jié)論
　　1、HD、HAD各病變段腸管肌層內(nèi)ICCs的分布密度較正常腸管均為減少，提示ICCs可能與HD、HAD的發(fā)生、發(fā)展相關(guān)。
　　2、HD、HAD各病變段腸管肌層ICCs中caspase-3和bcl-2的陽(yáng)性表達(dá)正反互補(bǔ)，二者表達(dá)情況的改變與ICCs分布密度的改變呈正負(fù)相關(guān)，提示caspase-3和bcl-2異常表達(dá)的ICCs在HD及其HAD發(fā)病中起著重要作用。
　　3、透射電鏡也