內(nèi)源性硫化氫在血吸蟲病性門靜脈高壓癥中的作用及機(jī)制.pdf

1、由于門靜脈系統(tǒng)血流動力學(xué)異常變化而產(chǎn)生的綜合征稱為門靜脈高壓癥，目前其發(fā)病機(jī)制尚不非常明確，主要病理生理特點是門靜脈壓力增高、門靜脈系統(tǒng)高動力循環(huán)及門靜脈系統(tǒng)的高血流量。血管活性物質(zhì)在門靜脈高壓癥發(fā)病中的重要作用已經(jīng)被認(rèn)識，血管收縮劑或舒張劑通過調(diào)節(jié)全身或內(nèi)臟血管的舒縮，影響門體側(cè)支循環(huán)血流和肝內(nèi)或門體側(cè)支循環(huán)的阻力。
　　 內(nèi)源性硫化氫參與了多種生理與病理過程，目前內(nèi)源性硫化氫這種第三種氣體信號分子已經(jīng)成為研究熱點。根據(jù)內(nèi)源性

2、硫化氫在心血管系統(tǒng)及神經(jīng)系統(tǒng)疾病中的作用研究，我們推測其在門靜脈高壓癥的發(fā)生、發(fā)展、惡化及預(yù)后中可能也起著一定的作用。內(nèi)源性硫化氫在門靜脈高壓癥發(fā)病機(jī)制中的作用尚屬起步階段，因此本課題將以血吸蟲病性門靜脈高壓癥為研究模型，分析H2S在門靜脈高壓發(fā)生、發(fā)展過程中所起的作用，以探討H2S在門靜脈高壓癥中變化及作用，進(jìn)一步研究門靜脈高壓癥的發(fā)病機(jī)制，為門靜脈高壓癥的臨床治療探索新思路或新方法。
　　 一、目的
　　 1.探究人

3、門靜脈高壓癥患者是否存在內(nèi)源性硫化氫的改變。以測定門靜脈高壓癥患者不同Child分級之間的H2S水平差異，發(fā)現(xiàn)H2S在是否在門靜脈高壓癥患者血漿中發(fā)生變化，并探討其在門靜脈高壓癥時的作用機(jī)制。
　　 2．建立血吸蟲病性門靜脈高壓癥兔疾病模型，觀察不同時期其肝臟形態(tài)改變、肝纖維化情況、肝功能、門靜脈直徑，為課題的順利實施提供穩(wěn)定、可靠的動物模型。
　　 3．在建立血吸蟲病性門靜脈高壓癥兔疾病模型的基礎(chǔ)上，觀察門靜脈高壓癥兔

4、血漿中H2S含量的變化，以及與肝功能、肝纖維化指標(biāo)之間的關(guān)系，以探討H2S在門靜脈高壓癥兔發(fā)病過程中的變化及意義。
　　 4．觀察兔肝組織中H2S含量、硫化氫合酶CSE的活性及CSE Mrna表達(dá)情況的變化及其與肝纖維化組織學(xué)病變的關(guān)系，從而進(jìn)一步探討H2S在血吸蟲病性門靜脈高壓癥的發(fā)病機(jī)制中的作用。
　　 5．明確血吸蟲病性門靜脈高壓癥兔內(nèi)源性H2S對HO-1/CO通路的調(diào)節(jié)作用，闡明內(nèi)源性硫化氫與一氧化碳的調(diào)節(jié)網(wǎng)絡(luò)，

5、以及內(nèi)源性硫化氫在門靜脈高壓癥發(fā)病、維持高動力循環(huán)、血管構(gòu)型改建等的作用機(jī)制。
　　 二、方法
　　 1.收集2007年9月～2007年12月在華中科技大學(xué)同濟(jì)醫(yī)學(xué)院附屬同濟(jì)醫(yī)院綜合醫(yī)療科病房及器官移植病房住院治療的肝硬化門靜脈高壓癥患者臨床資料及血樣標(biāo)本。對照組為同期于同濟(jì)醫(yī)院體檢健康人群。多普勒超聲檢查門靜脈管徑(PVC)，確定門靜脈高壓癥的Child分級，去蛋白法測定血漿H2S含量。
　　 2．采用腹部敷貼

6、法感染血吸蟲尾蚴制作血吸蟲病性門靜脈高壓癥兔模型，感染后8W、12W、16W行肝臟MRI檢查，留取血標(biāo)本， HE染色、透射電鏡觀察肝組織形態(tài)學(xué)變化。 3．采用去蛋白的方法測定血漿H2S含量，采用放射免疫法檢測血清HA、C-IV、LN及PCⅢ，并分析血漿H2S含量與肝纖維化指標(biāo)之間的相關(guān)關(guān)系。
　　 4．檢測肝組織中H2S含量、肝組織中硫化氫合酶活性，以RT-PCR檢測肝組織CSE Mrna的表達(dá)選取第12W動物模型行肝臟HE染色

7、進(jìn)行肝組織形態(tài)學(xué)觀察。
　　 5．將采用分子生物學(xué)技術(shù)、免疫組化染色技術(shù)和生物化學(xué)檢測方法來觀察內(nèi)源性硫化氫體系對血吸蟲病性門靜脈高壓癥兔HO-1/CO通路的影響。
　　 三、結(jié)果
　　 1.門靜脈高壓癥患者不同Child分級的肘靜脈血漿內(nèi)源性H2S含量差異具有統(tǒng)計學(xué)意義，且與對照組均具有統(tǒng)計學(xué)差異。門靜脈高壓癥患者血漿H2S含量與其PVC具有負(fù)線性相關(guān)關(guān)系。
　　 2．兔血吸蟲尾蚴急性感染成功率100％

8、，模型組大體及MRI可見肝體積縮小，組織變硬，肝表面凹凸不平，中量腹水，脾臟腫大。HE及透射電鏡證實肝纖維化存在。
　　 3．外周血、門靜脈血血漿H2S濃度與門靜脈高壓癥的嚴(yán)重程度、肝臟標(biāo)本大體、肝纖維化指標(biāo)呈負(fù)相關(guān)，且隨著門靜脈高壓癥的情加重呈逐漸降低的趨勢，給予硫化氫外源性供體NaHS后，各項指標(biāo)較模型組好轉(zhuǎn)；給予了CSE酶抑制劑PPG后，各項指標(biāo)較模型組加重。
　　 4.PHT組兔肝組織中H2S含量、肝組織中硫化氫

9、合酶活性均較對照組降低，RT-PCR檢測肝組織CSE Mrna的表達(dá)亦減少。NaHS可引起門靜脈高壓癥兔肝組織中H2S合酶活性及H2S含量升高，肝臟病理學(xué)檢查提示匯管區(qū)肝纖維化較同期模型組減輕；通過腹腔注射H2S合成酶CSE的抑制劑PPG顯示門靜脈高壓癥兔肝組織中H2S合酶活性及H2S含量下降，肝臟病理學(xué)檢查提示肝匯管區(qū)纖維化加重。
　　 5． PHT組與對照組相比，兔血漿中CO含量、肝組織HO-1活性、肝組織HO-1蛋白的表達(dá)

10、、肝組織HO-1Mrna表達(dá)的增加。NaHS+PHT組以上各指標(biāo)均較PHT下降，而PHT+PPG組與PHT組相比，均無明顯改變。
　　 四、結(jié)論
　　 1.門靜脈高壓癥患者內(nèi)源性硫化氫含量低于正常人群，并且隨病情的分級加重而逐漸降低，血漿H2S含量與門靜脈管徑、Child分級呈負(fù)相關(guān)，說明門靜脈高壓癥時H2S含量降低，為課題的進(jìn)一步開展提供了理論基礎(chǔ)與實驗技術(shù)的可靠性。
　　 2．本模型屬自然演變形成，符合人體感

11、染血吸蟲病所致的門靜脈高壓癥的病程規(guī)律，且造模成功率較高、死亡率較低，是研究血吸蟲病及門脈高壓癥的理想動物模型。
　　 3．在門靜脈高壓癥的發(fā)病過程中血漿內(nèi)源性H2S可能起保護(hù)作用，體內(nèi)H2S的下調(diào)可能與門靜脈高壓癥的發(fā)病機(jī)制相關(guān)。
　　 4．表明內(nèi)源性硫化氫參與了門靜脈高壓癥兔肝纖維的進(jìn)展，兔肝內(nèi)H2S的減少主要與肝組織CSE酶活性減弱和表達(dá)減少有關(guān)，可能在門靜脈高壓癥的發(fā)生機(jī)制中發(fā)揮重要作用，并對維持門靜脈高壓癥有一