復方丹參滴丸對小鼠miRNA表達調(diào)控的研究.pdf

1、復方丹參滴丸是由丹參、三七、冰片三味中藥組成的復方藥，該復方藥主要適應癥為冠心病、心絞痛，此外，對高血壓、高脂血癥、腦血栓、糖尿病等多種疾病也有很好的療效。藥理學研究表明，復方丹參滴丸中酚酸類成分具有提高機體抗凝和纖溶活性、抑制血小板聚集、抗血栓形成、抗氧化及保護心臟微血管內(nèi)皮細胞、改善微循環(huán)障礙等作用；皂苷類成分具有改善血管內(nèi)皮細胞功能、抑制血管平滑肌細胞增殖、抗血栓形成、擴張血管及保護心肌等作用。
　　為了解復方丹參滴丸對心血

2、管疾病防治的作用機制，本實驗從研究復方丹參滴丸對小鼠體內(nèi)microRNA（miRNA）表達的影響，通過深入研究差異表達miRNA在心臟病防治中可能的作用，期望從一個全新的視角揭示復方丹參滴丸對心血管疾病防治的分子作用機制。
　　為了尋找復方丹參滴丸引起的小鼠體內(nèi)差異表達的內(nèi)源性miRNA，實驗中將喂食500ul4.4mg/ml復方丹參滴丸溶液的Institute for Cancer Research（ICR）小鼠作為實驗組，將喂

3、食等量水的ICR小鼠作為對照組，在0h、0.5h、1h、3h、6h和12h分別取小鼠眼眶靜脈血及心、肝、腎、肺和胃等器官，將小鼠眼眶靜脈血送公司測序sRNA庫，分析測序結(jié)果后發(fā)現(xiàn)有42條miRNA表達發(fā)生明顯差異，其中16條表達上調(diào)，26條表達下調(diào)。經(jīng)過quantitative reverse-transcription PCR(qRT-PCR)驗證后發(fā)現(xiàn)16條上調(diào)的miRNAs中有12個miRNA表達上調(diào)，1個miRNA表達下調(diào)，剩余

4、的3個 miRNA表達沒有明顯變化；而26條下調(diào)的miRNA中，有20個miRNA表達下調(diào)，1個miRNA表達上調(diào)，剩余的5個miRNA表達沒有明顯變化。這42條 miRNA均表現(xiàn)出明顯的組織特異性。在小鼠心臟中，血液中表達上調(diào)的16條miRNA中有11條miRNA表達上調(diào)，5條miRNA表達沒有明顯變化；血液中表達下調(diào)的26條miRNA中有21條表現(xiàn)為上調(diào)，其余5條miRNA表達沒有明顯改變。
　　為了驗證測序結(jié)果中差異表達的m

5、iRNA在心肌細胞凋亡和心肌細胞肥大過程中的作用，本實驗利用不同心肌肥大誘導劑鹽酸苯丙氨酸（PE，10μ M）、血管緊張素（AngⅡ,10μ g/L）和類胰島素生長因子1（IGF-1,100nM）誘導原代心肌細胞肥大，并檢測肥大誘導的心肌細胞中42條 miRNA表達情況，結(jié)果發(fā)現(xiàn)在42條差異表達的miRNA中，有19條miRNA在PE處理時表達明顯下調(diào)， 有6條miRNA在AngⅡ處理時表達變化最明顯，其余5條miRNA在IG

6、F-1處理時表達變化最明顯，而miR7084-5p在經(jīng)過PE和AngⅡ處理后的心肌細胞中均表達上調(diào)，IGF-1后表達下調(diào)
　　為了探索差異表達的miRNA在心肌細胞肥大及細胞凋亡中的作用，實驗中選擇5條 miRNA—miR-106a-5p、miR-1964-3p、miR-467d-3p、miR-468-3p和miR-672-5p進行驗證，結(jié)果發(fā)現(xiàn)miR106a-3p、miR467d-3p和miR486-3p表達受到抑制后心肌細胞直