家蠶谷胱甘肽-S-轉(zhuǎn)移酶基因轉(zhuǎn)錄水平定量研究.pdf

1、谷胱甘肽-S-轉(zhuǎn)移酶(glutathione S-transferases，GSTs)是一個(gè)多功能超基因家族，在昆蟲(chóng)抗性方面起到很重要的作用。為探究家蠶(Bombyx mori)谷胱甘肽-S-轉(zhuǎn)移酶基因(Bm GSTs)的功能，本研究采用雙跟蹤標(biāo)定實(shí)時(shí)熒光定量RT-PCR(dual spike-inqPCR)方法，對(duì)家蠶和野蠶(Bombyx mandarina)部分重要的Bm GSTs基因轉(zhuǎn)錄水平進(jìn)行了定量研究，主要研究結(jié)果如下：

2、>　　 1、BmGSTd1基因誘導(dǎo)表達(dá)定量分析
　　 采用實(shí)時(shí)熒光定量RT-PCR方法，對(duì)BmGSTd1基因在正常飼養(yǎng)及添食NaF的家蠶5齡幼蟲(chóng)不同組織中的轉(zhuǎn)錄水平進(jìn)行檢測(cè)，并采用家蠶Actin3、GAPDH、28S rRNA3種內(nèi)源參照基因?qū)z測(cè)結(jié)果進(jìn)行歸一化處理。結(jié)果表明：BmGSTd1基因在家蠶5齡幼蟲(chóng)各組織的轉(zhuǎn)錄水平存在差異，且采用不同內(nèi)參照基因歸一化的結(jié)果也有較大差異。研究認(rèn)為，檢測(cè)基因在不同組織中的轉(zhuǎn)錄水平，采用合

3、適的內(nèi)參照基因?qū)ΡＷC檢測(cè)結(jié)果的可靠性非常重要。
　　 2、不同蠶品種BmGSTs基因轉(zhuǎn)錄水平的測(cè)定
　　 采用dual spike-in qPCR方法，對(duì)野蠶和不同品種家蠶各組織中BmGSTs基因的轉(zhuǎn)錄水平進(jìn)行檢測(cè)，結(jié)果表明：不同蠶品種之間被測(cè)BmGSTs基因的轉(zhuǎn)錄水平存在差異，菁松和皓月BmGSTs基因的轉(zhuǎn)錄水平較高，老撾L11種的轉(zhuǎn)錄水平次之，大造和野桑蠶BmGSTs基因的轉(zhuǎn)錄水平相對(duì)較低；不同組織之間BmGSTs基

4、因的轉(zhuǎn)錄水平也存在一定的差異。
　　 3、殺蟲(chóng)劑誘導(dǎo)下BmGSTs基因轉(zhuǎn)錄水平的測(cè)定
　　 采用dual spike-in qPCR方法，測(cè)定了在殺蟲(chóng)劑敵敵畏和溴氰菊酯誘導(dǎo)下，家蠶L11和野蠶不同BmGSTs基因的表觀轉(zhuǎn)錄水平。結(jié)果表明：在敵敵畏和溴氰菊酯誘導(dǎo)下，老撾L11 BmGSTs基因在中腸的轉(zhuǎn)錄水平上調(diào)最顯著，其次是脂肪體。野桑蠶在溴氰菊酯誘導(dǎo)下，被測(cè)BmGSTs基因轉(zhuǎn)錄水平有顯著上調(diào)，而在敵敵畏誘導(dǎo)下，未檢測(cè)到

5、較高的轉(zhuǎn)錄水平。所選基因以BmGSTe5在中腸和BmGSTs1基因在脂肪體中被誘導(dǎo)上調(diào)為主，預(yù)測(cè)這兩個(gè)基因與家蠶抗性的關(guān)系比較密切。
　　 4、氟化物誘導(dǎo)下BmGSTs基因轉(zhuǎn)錄水平的測(cè)定
　　 采用dual spike-in qPCR方法，測(cè)定了家蠶皓月在NaF誘導(dǎo)下，5齡幼蟲(chóng)各組織BmGSTs基因的轉(zhuǎn)錄水平。結(jié)果表明：NaF對(duì)家蠶體內(nèi)某些組織BmGSTs基因的表達(dá)具有誘導(dǎo)作用，比如：中腸中的BmGSTe5和BmGSTs