促紅細胞生成素對膿毒癥大鼠心肌損傷的保護作用及其機制的相關性研究.pdf

1、目的：探討促紅細胞生成素(EPO)對膿毒癥大鼠心肌損傷的保護作用及其機制。
　　方法：健康昆明小鼠146只，隨機，雙盲分為4組：假手術組(Sham組n=35，開腹后不做任何處理)、羅氏芬組(Roc組n=35，模型復制后立即腹腔內(nèi)注射羅氏芬1mg/20g)、EPO干預組(EPO組n=35，模型復制后立即腹腔內(nèi)注射EPO1000IU/kg)和膿毒癥組(CLP組n=35，行盲腸結(jié)扎穿孔術)，觀察昆明小鼠盲腸結(jié)扎穿孔術后7天死亡率。健康S

2、D大鼠252只，隨機、雙盲分為3組：假手術組(n=8 Sham組，開腹后不做任何處理)、EPO干預組(n=8 EPO組，模型復制后立即腹腔內(nèi)注射EPO1000IU/kg)、膿毒癥組(n=8 CLP組，行盲腸結(jié)扎穿孔術)。盲腸結(jié)扎穿孔術后開始計時，在術后0h、3h、6h、12h、24h于右側(cè)頸總動脈插入接有壓力轉(zhuǎn)換器的導管，記錄左心室壓力變化曲線，計算左室收縮壓(LVSP)、左室壓力上升最大速度(+dp/dtmax)、左室壓力下降最大速度

3、(-dp/dtmax)。于術后0h、3h、6h、12h、24h經(jīng)下腔靜脈采血，應用酶聯(lián)免疫吸附試驗測定血清C-反應蛋白水平(CRP)、腫瘤壞死因子-a(TNF-a)、白介素-6(IL-6)、白介素-10(IL-10)、肌鈣蛋白Ⅰ(cTNI)、肌酸激酶(CK)、谷草轉(zhuǎn)氨酶(AST)和乳酸脫氫酶(LDH)水平。應用流式細胞儀，羅丹明123標記檢測心肌細胞線粒體膜電位；Annexin-V-FITC法檢測心肌細胞凋亡及心肌組織核因子-KB(NF

4、-KB p65)表達水平。光鏡下觀察大鼠心、肝、腎、肺的形態(tài)學變化。
　　數(shù)據(jù)處理采用SPSS13.0統(tǒng)計軟件包，各項指標以平均值±標準差(x-±s)表示，統(tǒng)計學軟件對組間差異做獨立樣本雙側(cè)t檢驗，P<0.05表示差異有顯著意義，P<0.01表示差異有非常顯著意義。
　　結(jié)果：所有膿毒癥組動物均出現(xiàn)心率、呼吸加快，體溫上升，精神反應差，嗜睡，豎毛，等內(nèi)毒素血癥狀態(tài)。觀察昆明小鼠盲腸結(jié)扎穿孔術后死亡率，Sham組術后3h左右恢

5、復至正常狀態(tài)，Roc組及EPO組昆明小鼠較CLP組在24h、48h死亡率明顯降低，差異具有統(tǒng)計學意義(P<0.01)。膿毒癥SD大鼠的LVSP及左室+dp/dtmax、-dp/dtmax較Sham組大鼠降低，差異具有統(tǒng)計學意義(P<0.01)，表明膿毒癥顯著影響大鼠左心舒縮功能。CLP組大鼠在3h即出現(xiàn)LVSP，+dp/dt max和-dp/dt max指標下降，在6h時達最低(67.4±6.1)mmHg，(2821±372.6)mmH

6、g/s，(-1351±151.3)mmHg/s，均低于Sham組(189.5±3.6)mmHg，(6021±103.6)mmHg/s，(-5245±176.3)mmHg/s，差異具有統(tǒng)計學意義(P<0.01)。EPO組大鼠較CLP組相比，LVSP、+dp/dtmax及-dp/dtmax均有所恢復，在3h、6h、12h及24h高于CLP組，差異具有統(tǒng)計學意義(P<0.01)。CLP組和EPO組大鼠各時點血清炎性介質(zhì)指標CRP、TNF-a、

7、IL-6、IL-10，心肌酶學指標cTNI、CK、AST、LDH水平均較Sham組顯著升高(P<0.05)，應用EPO后，EPO組的上述指標較CLP組相比均有不同程度降低，差異具有統(tǒng)計學意義(P<0.05)。CLP組、EPO組心肌細胞早期凋亡率(8.54±1.33)％、(1.81±0.79)％與Sham組(0.27±0.31)％比較均升高，差異具有統(tǒng)計學意義(P<0.01)，其中EPO組的細胞早期凋亡率低于CLP組，差異具有統(tǒng)計學意義(

8、P<0.01)。Sham組、EPO組及CLP組心肌線粒體膜電位分別為(340.42±25.90)、(286.25±24.02)及(192.26±23.69)，CLP組及EPO組大鼠的心肌細胞熒光峰明顯左移，亦即線粒體膜電位降低的細胞明顯增多，差異具有統(tǒng)計學意義(P<0.01)。在應用EPO干預后，EPO組較CLP組的心肌細胞熒光峰明顯右移，亦即明顯改善線粒體膜電位降低。EPO組、CLP組心肌組織NF-KB p65表達(276.23±28

9、.04)、(442.04±62.26)均高于Sham組(171.59±16.71)，其中EPO組的NF-KB p65表達低于CLP組，差異具有統(tǒng)計學意義(P<0.01)。應用EPO干預后，主要臟器損害的病理改變較膿毒癥組顯著減輕。
　　結(jié)論：EPO能減輕膿毒癥大鼠心肌損害，具有保護性作用；EPO可以抑制致炎因子TNF-a、IL-6，提高抗炎因子IL-10水平，減輕心肌炎癥反應；EPO可以改善線粒體膜電位的降低，具有對抗膿毒癥大鼠心