農桿菌介導GmWRKY21基因轉化大豆的研究.pdf

1、大豆營養(yǎng)豐富,蛋白與脂肪含量較高,是國際貿易中居于重要地位的經濟作物。發(fā)展大豆產業(yè)對解決我國大豆緊缺、滿足國內不斷增長的大豆消費需求具有十分重要的意義。傳統(tǒng)常規(guī)育種具有選擇效率低、育種周期長等缺點。相比之下,植物轉基因技術以其在改善大豆品質、增強耐逆性、提高產量等方面具有定向改良、簡便高效、周期較短等優(yōu)勢,為大豆育種技術的發(fā)展和提升開辟了新途徑。
　　 本項實驗分別以子葉節(jié)、帶一片子葉的胚尖作為外植體,通過農桿菌介導法將耐冷相關

2、轉錄因子基因GmWRKY21導入大豆,以期獲得耐冷性明顯提高的大豆新種質。取得如下主要研究成果:
　　 1、利用子葉節(jié)受體系統(tǒng)進行的大豆遺傳轉化實驗,主要對18個大豆基因型進行了篩選比較并測定了恢復培養(yǎng)階段GA3濃度對叢生芽誘導分化的影響。結果顯示,大豆叢生芽誘導率在不同基因型之間存在顯著性差異,較適于大豆組織培養(yǎng)體系的基因型主要包括‘浙春3號’、‘H0301’、‘油02-32’、‘吉小豆7號’、‘浙春2號’和‘A7601’等。

3、從這18個基因型中選取了誘導率有差異的5個基因型,通過凱氏定氮法分別測定其叢生芽中蛋白含量,發(fā)現(xiàn)叢生芽誘導率、叢生芽生長情況與叢生芽中蛋白含量之間無顯著相關性。以叢生芽誘導率及生長活力、重復穩(wěn)定性等方面均效果較好的基因型浙春3號作為受體材料,比較了不同濃度GA3培養(yǎng)基中外植體叢生芽誘導率的差異。結果顯示,當GA3濃度為0.5mg／L時,叢生芽誘導率最高,與其他濃度的誘導效率有顯著性差異,且叢生芽生長活力也相對較高,而濃度過高或者過低時都

4、會使叢生芽誘導率及活力下降。
　　 2、利用農桿菌介導的帶一片子葉的胚尖轉化法將耐低溫相關轉錄因子基因GmWRKY21轉入‘浙春5號’和‘中黃13’兩個大豆品種中。轉基因植株經目的基因的PCR檢測和轉化T-DNA區(qū)域構建特異性的PCR檢測得以確認。低溫耐逆實驗結果表明,脅迫處理前和處理后,轉基因植株相對電導率均顯著低于對照植株；與相對電導率變化不同,低溫脅迫后轉基因株系中脯氨酸含量的變化沒有統(tǒng)一規(guī)律；轉基因植株較非轉基因對照表現(xiàn)